Набір Cell Direct RT qPCR — Taqman Direct Cell Lysis Cell Ready Kits One-step qRT-PCR Kits Probe
Описи
У цьому продукті використовується унікальна буферна система лізису для швидкого вивільнення РНК із культивованих зразків клітин для реакцій RT-qPCR, усуваючи трудомісткий процес очищення РНК і лише 7 хвилин для отримання необхідної матриці РНК, завдяки суміші 5× Direct RT Mix, 2× Direct qPCR Mix-Taqman, що надається в наборі, може швидко й ефективно отримати кількісні результати ПЛР у реальному часі.
5× Direct RT Mix і 2× Direct qPCR Mix-Taqman мають сильну толерантність до інгібіторів і можуть виконувати ефективну реверсію та специфічну ампліфікацію, використовуючи лізат зразка, який потрібно виміряти, як шаблон.Реагент містить зворотну транскриптазу Foregene, ДНК-полімеразу Hot D-Taq, dNTPs, MgCl2, Reaction Buffer, PCR Optimizer and Stabilizer, який можна використовувати з буфером лізису для швидкого та легкого виявлення зразків, і має характеристики високої чутливості, специфічності та стабільності.
Технічні характеристики
200×20μl Rxns, 1000×20μl Rxns
Компоненти набору
| QuickEasyTMCell Direct RT-qPCR Kit-Taqman | ||||
| Компоненти набору Реакційна система qPCR 20 мкл | DRT-01021 | DRT-01022 | Примітка | |
| 200 т | 1000 т | |||
|
частина I | Буфер CL | 4 мл | 20 мл | Лізис клітин |
| Foregene Protease Plus II | 80 мкл | 400 мкл | ||
| Буфер ST | 400 мкл | 1 мл × 2 | ||
|
частина II | Ластик ДНК | 80 мкл | 400 мкл | |
| 5×Direct RT Mix * | 160 мкл | 800 мкл | RT | |
| 2× Direct qPCR Mix-Taqman * | 1 мл × 2 | 1,7 мл × 6 | КПЦР | |
| 20×ROX Reference Dye | 40 мкл | 200 мкл | ||
| ddH без РНКази2O | 1,7 мл | 10 мл | ||
| Посібник з експлуатації | 1 шт | 1 шт | ||
*:Cell Lysis, 5×Direct RT Mix, 2× Direct qPCR Mix-Taqman можна придбати окремо
Особливості та переваги
■Простий і ефективний: за допомогою технології Cell Direct RT зразки РНК можна отримати всього за 7 хвилин.
■ Попит на вибірку невеликий, можна протестувати лише 10 клітин.
■ Висока продуктивність: він може швидко виявляти РНК у клітинах, культивованих у 384, 96, 24, 12, 6-лункових планшетах.
■ DNA Eraser може швидко видаляти звільнені геноми, значно зменшуючи вплив на наступні експериментальні результати.
■ Оптимізована система RT-PCR робить двоетапну зворотну транскрипцію RT-PCR більш ефективною, а ПЛР більш специфічною та стійкою до інгібіторів реакції RT-PCR.
Аплікація комплекту
Сфера застосування: культивовані клітини.
- РНК, вивільнена в результаті лізису зразка: застосовується лише до матриці RT-qPCR цього набору.
- Набір можна використовувати для наступних цілей: аналіз експресії генів, перевірка ефекту глушіння генів, опосередкованого siRNA, скринінг ліків тощо.
Зберігання та термін придатності
Частина I цього набору повинна зберігатися в 4℃;Частина II повинна зберігатися при -20 ℃.
Foregene Protease Plus II слід зберігати при 4℃, не замерзати при -20 ℃.
Реагент 2×Direct qPCR Mix-Taqman слід зберігати при -20℃в темно;при частому використанні його також можна зберігати на 4℃ для короткочасного зберігання (використати протягом 10 днів).
Принципи розробки праймерів ПЛР у реальному часі
Прямий і зворотний буквари
Для ПЛР у реальному часі дизайн праймера дуже важливий.Праймери пов’язані зі специфічністю та ефективністю ПЛР-ампліфікації та можуть бути розроблені з посиланням на такі принципи:
- Довжина грунтовки: 18-30 п.н.
- Вміст ГХ: 40-60%.
- Значення Tm: програмне забезпечення для розробки праймера, наприклад Primer 5, може надати значення Tm праймера.Значення Tm перших і наступних праймерів повинні бути якомога ближчими.Також можна використовувати формулу розрахунку Tm: Tm = 4 °C (G + C) + 2 °C (A + T).Під час проведення ПЛР температуру нижче значення Tm праймера 5 °C зазвичай вибирають як температуру відпалу (відповідне підвищення температури відпалу може збільшити специфічність реакції ПЛР).
- Праймери та продукти ПЛР:
- Довжина продукту ПЛР-ампліфікації праймеру переважно становить 100-150 bp.
- Наскільки це можливо, слід уникати дизайнерських праймерів у вторинній структурній зоні шаблону.
- Уникайте утворення 2 або більше комплементарних основ між 3'-кінцями верхнього та нижнього за течією праймерів.
- Основа грунтовки 3' не може бути присутня з 3 додатковими послідовними G або C.
- Самі праймери не можуть мати комплементарних структур, інакше утворюється шпилькова структура, яка впливає на ПЛР-ампліфікацію.
- ATCG слід розподілити якомога рівномірніше в послідовності праймерів, і слід уникати 3' кінцевої основи, оскільки T.
Додаток1: Cell DirectRT-qPCR Компонент комплектуt пакет добавок
1. Розчин для лізису клітин
| Розчин для лізису клітин | |||
| Компоненти набору (24-лункова система лізису/лунка) | DRT-01011-A1 | DRT-01011-A2 | |
| 100 т | 500 т | ||
| частиная | Буфер CL | 20 мл | 100 мл |
| Foregene Protease Plus II | 400 мкл | 1 мл × 2 | |
| Буфер ST | 1 мл × 2 | 10 мл | |
| частинаII | Ластик ДНК | 400 мкл | 1 мл × 2 |
| RT Mix | |
| Компоненти набору (20 мкл реакційна система) | DRT-01011-B1 |
| 200 т | |
| 5× Direct RT Mix | 800 мкл |
| ddH без РНКази2O | 1,7 мл × 2 |
| qPCR Mix | ||
| Компоненти набору (20 мкл реакційна система) | DRT-01021-C1 | DRT-01021-C2 |
| 200 т | 1000 т | |
| 2× Direct qPCR Mix-Taqman | 1 мл × 2 | 1,7 мл × 6 |
| 20 × еталонний барвник ROX | 40 мкл | 200 мкл |
| ddH без РНКази2O | 1,7 мл | 10 мл |
Інструкції з експлуатації:
