Набір Cell Direct RT qPCR — SYBR GREEN I Набори для одноетапної qRT-PCR для прямого лізису клітин
Описи
У цьому наборі використовується унікальна буферна система лізису, яка може швидко вивільняти РНК із культивованих клітинних зразків для реакцій RT-qPCR, таким чином усуваючи трудомісткий і трудомісткий процес очищення РНК.Шаблон РНК можна отримати всього за 7 хвилин.5×Direct RT Mix і 2×Реагенти Direct qPCR Mix-SYBR, що входять до складу набору, дозволяють швидко й ефективно отримувати кількісні результати ПЛР у реальному часі.
5×Direct RT Mix і 2×Direct qPCR Mix-SYBR має сильну толерантність до інгібіторів, і лізат зразків можна використовувати як матрицю безпосередньо для RT-qPCR.Цей набір містить унікальну високоафінну РНК зворотну транскриптазу Foregene та ДНК-полімеразу Hot D-Taq, dNTP, MgCl2, реакційний буфер, оптимізатор і стабілізатор ПЛР.
Технічні характеристики
200×20μl Rxns, 1000×20μl Rxns
Компоненти набору
| Частина І | Буфер CL |
| Foregene Protease Plus II | |
| Буфер ST | |
| Частина II | Ластик ДНК |
| 5× Direct RT Mix | |
| 2× Direct qPCR Mix-SYBR | |
| 50 × еталонний барвник ROX | |
| ddH2O без РНКази | |
| Інструкції | |
Особливості та переваги
■Простий і ефективний: за допомогою технології Cell Direct RT зразки РНК можна отримати всього за 7 хвилин.
■ Попит на вибірку невеликий, можна протестувати лише 10 клітин.
■ Висока продуктивність: він може швидко виявляти РНК у клітинах, культивованих у 384, 96, 24, 12, 6-лункових планшетах.
■ DNA Eraser може швидко видаляти звільнені геноми, значно зменшуючи вплив на наступні експериментальні результати.
■ Оптимізована система RT-PCR робить двоетапну зворотну транскрипцію RT-PCR більш ефективною, а ПЛР більш специфічною та стійкою до інгібіторів реакції RT-PCR.
Аплікація комплекту
Сфера застосування: культивовані клітини.
- РНК, вивільнена в результаті лізису зразка: застосовується лише до матриці RT-qPCR цього набору.
- Набір можна використовувати для наступних цілей: аналіз експресії генів, перевірка ефекту глушіння генів, опосередкованого siRNA, скринінг ліків тощо.
Діаграма
Зберігання та термін придатності
Частину I цього набору слід зберігати при 4 ℃;Частина II повинна зберігатися при -20 ℃.
Foregene Protease Plus II слід зберігати при 4℃, не замерзати при -20 ℃.
Реагент 2×Direct qPCR Mix-SYBR слід зберігати при -20℃в темно;при частому використанні його також можна зберігати на 4℃ для короткочасного зберігання (використати протягом 10 днів).
Принципи розробки праймерів ПЛР у реальному часі
Прямий і зворотний буквари
Для ПЛР у реальному часі дизайн праймера дуже важливий.Праймери пов’язані зі специфічністю та ефективністю ПЛР-ампліфікації та можуть бути розроблені з посиланням на такі принципи:
Довжина грунтовки: 18-30 п.н.
Вміст ГХ: 40-60%.
Значення Tm: програмне забезпечення для розробки праймера, наприклад Primer 5, може надати значення Tm праймера.Значення Tm перших і наступних праймерів повинні бути якомога ближчими.Також можна використовувати формулу розрахунку Tm: Tm = 4 °C (G + C) + 2 °C (A + T).Під час проведення ПЛР температуру нижче значення Tm праймера 5 °C зазвичай вибирають як температуру відпалу (відповідне підвищення температури відпалу може збільшити специфічність реакції ПЛР).
Праймери та продукти ПЛР:
Довжина продукту ПЛР-ампліфікації праймеру переважно становить 100-150 bp.
Наскільки це можливо, слід уникати дизайнерських праймерів у вторинній структурній зоні шаблону.
Уникайте утворення 2 або більше комплементарних основ між 3'-кінцями верхнього та нижнього за течією праймерів.
Основа грунтовки 3' не може бути присутня з 3 додатковими послідовними G або C.
Самі праймери не можуть мати комплементарних структур, інакше утворюється шпилькова структура, яка впливає на ПЛР-ампліфікацію.
ATCG слід розподілити якомога рівномірніше в послідовності праймерів, і слід уникати 3' кінцевої основи, оскільки T.
Додаток 1: Додатковий пакет компонентів Cell Direct RT-qPCR Kit
1.Розчин для лізису клітин
|
| |||
| Компоненти набору (24-лункова система лізису/лунка) | DRT-01011-A1 | DRT-01011-A2 | |
| 100 т | 500 т | ||
| частиная | Буфер CL | 20 мл | 100 мл |
| Foregene Protease Plus II | 400 мкл | 1 мл × 2 | |
| Буфер ST | 1 мл × 2 | 10 мл | |
| частинаII | Ластик ДНК | 400 мкл | 1 мл × 2 |
2.RT Mix
|
| |
| Компоненти набору (20 мкл реакційна система) | DRT-01011-B1 |
| 200 т | |
| 5× Direct RT Mix | 800 мкл |
| ddH без РНКази2O | 1,7 мл × 2 |
|
| ||
| Компоненти набору (20 мкл реакційна система) | DRT-01011-C1 | DRT-01011-C2 |
| 200 т | 1000 т | |
| 2× Direct qPCR Mix-SYBR | 1 мл × 2 | 1,7 мл × 6 |
| 50 × еталонний барвник ROX | 40 мкл | 200 мкл |
| ddH без РНКази2O | 1,7 мл | 10 мл |
Інструкції з експлуатації:
