Набір для виділення загальної РНК рослин. Набір для виділення загальної РНК для рослин із низьким вмістом полісахаридів і поліфенолів
Технічні характеристики
50 Preps, 200 Preps
У наборі використовується спінова колонка та формула, розроблені Foregene, які можуть ефективно витягувати високочисту та високоякісну загальну РНК із різних рослинних тканин із низьким вмістом полісахаридів та поліфенолів.Для зразків рослин із високим вмістом полісахаридів або поліфенолів рекомендується використовувати набір Plant Total RNA Isolation Plus Kit, щоб отримати кращі результати екстракції РНК.Набір містить колонку для очищення ДНК, яка може легко видалити геномну ДНК із супернатанту та тканинного лізату.Колонка лише з РНК може ефективно зв’язувати РНК.Набір може обробляти велику кількість зразків одночасно.
Вся система не містить РНКази, тому очищена РНК не буде розкладатися.Буфер PRW1 і буфер PRW2 гарантують, що отримана РНК не забруднена білком, ДНК, іонами та органічними сполуками.
Компоненти набору
| Буфер PSL1, Буфер PS, Буфер PSL2 |
| Буфер PRW1, буфер PRW2 |
| ddH без РНКази2О, колонка очищення ДНК |
| Колонка лише РНК |
| Інструкції |
Особливості та переваги
■ Робота при кімнатній температурі (15-25 ℃) протягом усього процесу, без крижаної бані та низькотемпературного центрифугування.
■ Повний комплект Не містить РНКази, не потрібно турбуватися про деградацію РНК.
■ DNA-Cleaning Column спеціально зв’язується з ДНК, тому набір може видалити забруднення геномної ДНК без додавання ДНКази.
■ Високий вихід РНК: колонка лише для РНК і унікальна формула можуть ефективно очищати РНК.
■ Швидка швидкість: проста в експлуатації та може бути виконана протягом 30 хвилин.
■ Безпека: органічні реагенти не потрібні.
■ Висока якість: очищені фрагменти РНК мають високу чистоту, не містять білків та інших домішок і можуть відповідати різноманітним експериментальним застосуванням.
Аплікація комплекту
Він підходить для екстракції та очищення загальної РНК зі свіжих або заморожених зразків рослинної тканини (особливо свіжої тканини листя рослин) з низьким вмістом полісахаридів і поліфенолів.
Потік роботи
Діаграма
Plant Total RNA Isolation Kit Plus обробив 50 мг свіжого листя полісахаридів і поліфенолів, а 5% очищену РНК перевірили за допомогою електрофорезу.
1: Банан
2: Гінкго
3: Бавовна
4: Гранат
Зберігання та термін придатності
Набір можна зберігати 12 місяців при кімнатній температурі (15–25 ℃) у сухому середовищі та 2–8 ℃ довше (24 місяці).
Буфер PSL1 можна зберігати при 4 ℃ протягом 1 місяця після додавання 2-гідрокси-1-етанетіолу (необов’язково).
Керівництво з аналізу проблем
Наступний аналіз проблем, з якими ви можете зіткнутисяЗавод ВсьогоRNA extraction will help you with your experiments. In addition, for other experimental or technical problems in addition to operating instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. If you have any needs, please contact us at: 028-83360257 or E-mali : Tech@foregene.com.
Спинна колонка засмічена
Блокування спинової колонки призведе до зниження виходу РНК або навіть до неможливості очищення для отримання РНК, а якість отриманої РНК буде низькою.
Аналіз поширених причин:
1. Зразок не розірвано повністю.
Неповна фрагментація зразка може заблокувати колонку очищення ДНК, що також може вплинути на вихід і якість РНК.Ми рекомендуємо, щоб під час виконання фрагментації зразка швидко подрібнити в достатній кількості рідкого азоту, щоб максимально розщепити тканини, такі як клітинні стінки та клітинні мембрани зразків.Для рослинних зразків поліфенольних полісахаридів ми рекомендуємо вам використовувати Plant Total RNA Isolation Kit Plus.
2. Аспіруйте ізольовану супернатант колонки для очищення ДНК, аспіруйте можливий осад клітинних уламків.
Осад аспірованих клітинних уламків може засмічувати колонку лише з РНК під час процедур адсорбції РНК (див. крок 5 процедури, етап 6 процедури полісахаридних поліфенолів).Ми рекомендуємо бути обережними під час аспірації супернатанту, щоб уникнути аспірації залишків клітин.
3. Початкова кількість проби занадто велика.
Надмірне використання зразка призведе до неповної фрагментації зразка або неповного лізису клітин буфером PRL1 або буфером PSL1, що призведе до забивання очисної колонки для операцій очищення.Набір для виділення загальної РНК рослин має початковий максимум 50 мг на одне очищення обробленого зразка.Для рослинних зразків поліфенольних полісахаридів ми рекомендуємо спробувати набір Plant Total RNA Isolation Kit Plus.
4. Температура центрифуги занадто низька.
Виділення та очищення цілої РНК, за винятком руйнування зразка тканини рідким азотом, усі етапи виконуються при кімнатній температурі (20-25 °C).Деякі низькотемпературні центрифуги мають температуру нижче 20 °C, що може спричинити блокування колонки для очищення ДНК та/або колонки лише з РНК.Якщо це станеться, встановіть температуру центрифуги на 20-25 °C і попередньо нагрійте суміш для лізису та/або додавання супернатанту для розділення етанолу до 37 °C.
РНК не екстрагується або вихід РНК низький
Зазвичай існує багато факторів, які впливають на ефективність відновлення, наприклад: вміст РНК зразка, метод роботи, об’єм елюції тощо.
Нижче наведено аналіз поширених причин:
1. Під час операції було проведено центрифугування на крижаній бані або при низькій температурі (4°C).
Рекомендація: Весь процес використовуйте при кімнатній температурі (15-25°C), не використовуйте крижану ванну та центрифугування при низькій температурі.
2.РНК була деградована внаслідок неправильного зберігання зразка або тривалого зберігання зразка.
Рекомендація: свіжозібрані зразки слід швидко заморозити в рідкому азоті, а потім зберігати при -80°C протягом тривалого часу, уникати повторного заморожування та розморожування зразків;або негайно замочіть зразки в розчині стабілізатора РНК RNAlater (зразки тварин).
3.Недостатня фрагментація зразка та лізис призводять до блокування очисної колонки.
Порада: під час подрібнення тканини переконайтеся, що тканина достатньо подрібнена, і швидко перемістіть її в попередньо підготовлений буфер PSL1 (підтвердьте, що додано правильну пропорцію β-ME, див. крок 1 процедури).
4. Елюент було додано неправильно.
Пропозиція: переконайтеся, що ddH не містить РНКази2O капають в середину мембрани очисної колонки.
5. У буфер PSL2 або буфер PRW2 не було додано правильний об’єм абсолютного етанолу.
Пропозиція: будь ласка, дотримуйтесь інструкцій, додайте правильний об’єм абсолютного етанолу в буфер PSL2 і буфер PRW2 і добре перемішайте перед використанням набору.
6. Кількість зразка тканини є невідповідною.
Рекомендація: використовуйте 50 мг тканини на 500 мкл буфера PSL1.Використання занадто великої кількості тканини зменшить кількість екстрагованої РНК, і чистота отриманої РНК також буде знижена.Ми наполегливо рекомендуємо, щоб початкова доза зразка не перевищувала 50 мг на операцію екстракції РНК.
7. Невідповідний об’єм елюювання або неповне елюювання.
Пропозиція: Об’єм елюенту очисної колонки становить 50-200 мкл;якщо ефект елюції незадовільний, рекомендується продовжити час при кімнатній температурі після додавання попередньо нагрітого ddH без РНКази2O, наприклад 5-10 хв.
8. Очисна колонка має залишок етанолу після промивання буфером PRW2.
Порада: якщо порожню пробірку центрифугують протягом 1 хвилини, і після промивання в буфері PRW2 все ще залишається етанол, ви можете збільшити час центрифугування порожньої пробірки до 2 хвилин або помістити колонку для очищення при кімнатній температурі на 5 хвилин, щоб повністю видалити залишки етанолу.
9. Набір використовувався неправильно.
Порада: для рослинних зразків поліфенольних полісахаридів за допомогою звичайних наборів, таких як набір для виділення загальної РНК рослин, можливо, не вдасться отримати ідеальні зразки РНК.Ми рекомендуємо вам використовувати Plant Total RNA IsolationKit Plus, який спеціально розроблений для рослинних зразків поліфенольних полісахаридів.Набір, спеціально розроблений для вилучення РНК із рослинних зразків поліфенолів і полісахаридів.
Значення OD260/OD280 низьке
Елюція РНК ddH2O і використовується для показів спектрофотометра, що призводить до низьких значень OD260/OD280.Ми рекомендуємо використовувати 10 мМ Tris-HCl, pH 7,5 (замість ddH без РНКази2O для елюції РНК), щоб отримати відносно правильні значення OD260/OD280, див. «Аналіз концентрації та очищення РНК» на сторінці 19.
Очищена РНК розкладається
Якість очищеної РНК залежить від таких факторів, як збереження зразка, забруднення РНКазою та маніпуляції.
Аналіз поширених причин:
1. Зразки тканин не зберігалися вчасно після збору.
Рекомендація: якщо зразки тканин не були використані вчасно після збору, будь ласка, негайно зберігайте їх у рідкому азоті при низькій температурі або перенесіть їх до -80°C для тривалого зберігання після швидкого заморожування в рідкому азоті, або негайно занурте зразки в розчин стабілізатора РНК RNAlater (зразки тварин).Для екстракції РНК спробуйте використовувати свіжозібрані зразки тканин.
2.Повторне заморожування та відтавання зразків тканин.
Порада: при зберіганні зразків тканин найкраще розрізати їх на невеликі шматочки для збереження та вийняти їх частину під час використання, щоб уникнути деградації РНК, спричиненої повторним заморожуванням і розморожуванням зразків.
3. РНКазу вводять в операційній або не надягають одноразові рукавички, маски тощо.
Пропозиція: Експерименти з екстракції РНК найкраще проводити в окремих операціях РНК, а лабораторний стіл слід очистити перед експериментом, а під час експерименту слід носити одноразові рукавички та маски, щоб уникнути деградації РНК, спричиненої введенням РНКази найбільшою мірою.
4. Реагент забруднений РНКазою під час використання.
Пропозиція: замініть на нову серію наборів для екстракції загальної РНК рослин для відповідних експериментів.
5. Центрифужні пробірки та наконечники піпеток, які використовуються для обробки РНК, забруднені РНКазою.
Пропозиція: переконайтеся, що центрифужні пробірки, наконечники піпеток, піпетки тощо, які використовуються для екстракції РНК, не містять РНКази.
Інструкції з експлуатації:
Інструкція з використання набору для виділення тотальної РНК рослин
