Набір для виділення загальної РНК тварин. Набори для виділення та очищення загальної РНК для тканин і клітин тварин
Опис набору:
Швидко та ефективно витягуйте загальну РНК високої чистоти та високої якості з різних тканин тварин.
Не потрібно турбуватися про деградацію РНК.Вся система не містить РНКази
Ефективно видаліть ДНК за допомогою DNA-Cleaning Column
Видалення ДНК без додавання ДНКази
Простий — усі операції виконуються при кімнатній температурі
Швидко — операцію можна завершити за 30 хвилин
Безпечно — не використовуються органічні реагенти
Висока чистота—OD260/280≈1,8-2,1
Опис комплектів
50 Preps, 200 Preps
Цей комплект використовуєобертовий стовпчик і формуларозроблений нашою компанією, який може витягувати високочисту та високоякісну загальну РНК з різних тканин тварин з високою ефективністю. Він забезпечує ефективну колонку для очищення ДНК, яка може легко відокремлювати та адсорбувати геномну ДНК із супернатанту та тканинного лізату, просто та заощаджуючи час;Колонка лише з РНК може ефективно зв’язувати РНК і може оброблятися одночасно за допомогою унікальної формули. Багато зразків.
Вся система не містить РНКази, тому екстрагована РНК не деградує;Buffer RW1, Buffer RW2 система промивання буфера, щоб отримана РНК була вільною від забруднення білками, ДНК, іонами та органічними сполуками.
Компоненти набору
| Набір для виділення тотальної РНК тварин | ||
| Компоненти набору | RE-03011 | RE-03014 |
| 50 т | 200 т | |
| Буфер RL1* | 25 мл | 100 мл |
| Буфер RL2 | 15 мл | 60 мл |
| Буфер RW1* | 25 мл | 100 мл |
| Буфер RW2 | 24 мл | 96 мл |
| ddH2O без РНКази | 10мл | 40мл |
| Стовпець лише РНК | 50 | 200 |
| Колонка для очищення ДНК | 50 | 200 |
| Посібник з експлуатації | 1 шт | 1 шт |
Інформація про Продукт
| Формат | Спиновий стовпчик | Очисний компонент | Форгенна колонка, реагент |
| Флюс | 1-24 проби | Час на пригот | ~30 хв (24 зразки) |
| Центрифуга | Настільна центрифуга | Піролізна сепарація | Відцентрова сепарація |
| Зразок | тваринна тканина;клітина | Кількість зразків | Тканина: 10-20 мг;Комірка: (1-5)×106 |
| Обсяг елюції | 50-200 мкл | Максимальний обсяг завантаження | 850 мкл |
Особливості та переваги
■ Не потрібно турбуватися про деградацію РНК;вся система не містить РНКази
■ Ефективно видаліть ДНК за допомогою колонки для очищення ДНК
■ Видалення ДНК без додавання ДНКази
■ Прості – усі операції виконуються при кімнатній температурі
■ Швидко - операцію можна завершити за 30 хвилин
■ Безпечно - органічні реагенти не потрібні
■ Висока чистота -OD260/280≈1,8-2,1
Аплікація комплекту
Він підходить для вилучення та очищення загальної РНК із різних свіжих або заморожених тканин тварин або культивованих клітин.
Параметри продукту
■ Додаткові програми: синтез кДНК першого ланцюга, RT-PCR, молекулярне клонування, Норзерн-блот тощо.
■ Зразки: тканини тварин, культивовані клітини
■ Дозування: тканини 10-20 мг, клітини (2-5) × 106
■ Максимальна здатність зв’язування ДНК колонки для очищення: 80 мкг
■ Об'єм елюції: 50-200 мкл
Діаграма
Набір для виділення загальної РНК тварин, оброблений 20 мг
Свіжі зразки мишей, взяти 5% очищеної сумарної РНК 1% агару
Глікогелевий електрофорез
1: Селезінка 2: Нирка
3: Печінка 4: Серце
Зберігання та термін придатності
Набір можна зберігати 24 місяці при кімнатній температурі (15–25 ℃) або 2–8 ℃ довше.Буфер RL1 можна зберігати при 4 ℃ протягом 1 місяця після додавання β-меркаптоетанолу (необов’язково).
Цитовані статті
1.IF:18.808:Чжен, К., Цинь, Ф., Луо, Р. та ін.Навантажені мРНК ліпідоподібні наночастинки для редагування основи печінки за допомогою оптимізації центрального композитного дизайну.Adv.Функція.Матер.2021, 31, 2011068.doi:10.1002/adfm.202011068.
2.IF:18.187:He X, Hong W, Yang J та ін.Спонтанний апоптоз клітин у терапевтичному препараті стовбурових клітин має імуномодулюючий ефект через вивільнення фосфатидилсерину.Сигнал Transduct Target Ther.14 липня 2021; 6 (1): 270.doi: 10.1038/s41392-021-00688-z.
3.IF: 17,97: Dai Z, Liu H, Liao J та ін.Модифікація тРНК N7-метилгуанозину посилює трансляцію онкогенної мРНК і сприяє прогресуванню внутрішньопечінкової холангіокарциноми.Mol Cell.29 липня 2021: S1097-2765(21)00555-4.doi: 10.1016/j.molcel.2021.07.003.
4.IF: 9,225: Цао Х, Шу І, Чень І та ін.Mettl14-опосередкована модифікація m6A сприяє регенерації печінки шляхом підтримки гомеостазу ендоплазматичного ретикулуму.Cell Mol Gastroenterol Hepatol.2021; 12 (2): 633-651.doi: 10.1016/j.jcmgh.2021.04.001.
Набори для ізоляції РНК інші зразки джерелдоступні:
Клітина, рослина, вірус, кров тощо.
РНК не екстрагується або вихід РНК низький
Часто існують різні фактори, які впливають на ефективність відновлення, наприклад: вміст РНК у зразку тканини, метод операції, об’єм елюції тощо.
1. Під час роботи проводили льодову баню або кріогенне (4 °C) центрифугування.
Рекомендація: Працюйте при кімнатній температурі (15-25 °C) протягом усього процесу, не використовуйте крижану ванну та не центрифугуйте при низьких температурах.
2. Неналежне збереження зразка або надмірний час зберігання зразка.
Рекомендація: Зберігайте зразки при -80 °C або заморожуйте в рідкому азоті та уникайте повторного заморожування-розморожування;спробуйте використати свіжу тканину або культивовані клітини для виділення РНК.
3. Недостатній лізис зразка.
Рекомендація: під час гомогенізації тканини переконайтеся, що тканина достатньо гомогенізована, а клітини тканини достатньо розділені, щоб пояснити вивільнення РНК.
4. Елюент додано неправильно.
Рекомендація: переконайтеся, що ddH без РНКази2О додають по краплях до середини мембрани очисної колонки.
5. Правильний об’єм абсолютного етанолу не був доданий до буфера RL2 або буфера RW2.
Рекомендація: дотримуйтесь інструкцій, додайте правильний об’єм абсолютного етанолу в буфер RL2 і буфер RW2 і добре перемішайте перед використанням набору.
6. Невідповідне дозування зразка тканини.
Рекомендація: використовуйте 10-20 мг тканини або (1-5) × 106клітин на 500 мкл буфера RL1, оскільки надмірне використання тканин може призвести до зниження екстракції РНК.
7. Невідповідний об’єм елюювання або неповне елюювання.
Рекомендація: Об'єм елюювання очисної колонки становить 50-200 мкл;якщо ефект елюції незадовільний, рекомендується продовжити час розміщення при кімнатній температурі після додавання попередньо нагрітого ddH без РНКази2О, наприклад, протягом 5-10 хв.
8. Очисна колонка має залишок етанолу після промивання буфером RW2.
Рекомендація: якщо є залишок етанолу після промивання буфера RW2, центрифугуйте порожню пробірку протягом 1 хвилини, час для операції центрифугування порожньої пробірки можна збільшити до 2 хвилин, або колонку для очищення можна помістити при кімнатній температурі на 5 хвилин, щоб належним чином видалити залишки етанолу.
Очищена РНК розкладається
Якість очищеної РНК залежить від таких факторів, як збереження зразка, забруднення РНКазою та маніпуляції тощо.
1. Зразки тканин не зберігаються вчасно.
Рекомендація: якщо зразки тканин або клітини не були використані вчасно після збору, негайно кріоконсервуйте при -80 °C або в рідкому азоті.Щоб виділити РНК, використовуйте щойно взяту тканину або зразок клітини, коли це можливо.
2. Повторне заморожування-відтавання зразків тканин.
Рекомендація: при зберіганні зразків тканин найкраще розрізати їх на невеликі шматочки для збереження та видалити один із шматочків під час їх використання, щоб уникнути повторного заморожування-розморожування зразка та деградації РНК.
3. РНКазу вводять або не надягають під час операції одноразові рукавички, маски тощо.
Рекомендація: Експерименти з екстракції РНК краще проводити в окремих кімнатах для маніпуляцій з РНК, а стіл очищають перед експериментом.
Одягайте одноразові рукавички та маски під час експерименту, щоб мінімізувати деградацію РНК, викликану введенням РНКази.
4. Реагенти забруднені РНКазою під час використання.
Рекомендація: замініть на новий набір для виділення загальної РНК тварин для відповідних експериментів.
5. Центрифужні пробірки, наконечники тощо, які використовуються для маніпуляцій з РНК, забруднені РНКазою.
Рекомендація: переконайтеся, що центрифужні пробірки, наконечники, піпетки тощо, які використовуються для екстракції РНК, не містять РНКази.
Очищена отримана РНК впливає на подальші експерименти
РНК, очищена очисною колонкою, якщо вміст іонів солі, білка занадто великий, вплине на подальший експеримент, наприклад: зворотна транскрипція, Northern Blot et al.
1. Елюована РНК містить залишки іонів солі.
Рекомендація: переконайтеся, що правильний об’єм етанолу додано до буфера RW2, і виконайте 2 промивання очисної колонки на відцентровій швидкості, вказаній для роботи;якщо є будь-який залишок іонів солі, залиште колонку для очищення буфера RW2 на 5 хвилин при кімнатній температурі та виконайте центрифугування, щоб максимально видалити сольове забруднення.
2. Залишок етанолу в елюйованій РНК.
Рекомендація: переконайтеся, що після промивання буфера RW2 виконайте операцію центрифугування порожніх пробірок із вказаною швидкістю центрифугування, збільште час операції центрифугування порожніх пробірок до 2 хвилин, якщо все ще є залишок етанолу, або залиште його при кімнатній температурі на 5 хвилин після центрифугування порожніх пробірок, щоб максимізувати видалення залишків етанолу.
