(96 лунок) QuickEasy Cell Direct RT-qPCR Kit – SYBR Green I
Описи
The(96-лунка) QuickEasyTM Набір Cell Direct RT-qPCR–СИБР Грін Ізабезпечуєунікальна буферна система лізисуto швидко вивільняють РНКз культивованої клітинизразків для реакцій RT-qPCR, усуваючи трудомісткі та трудомісткіПроцес очищення РНК, який займає лише 7 хвилин, щоб отримати необхідну матрицю РНК.The5× Direct RT Mixі2× Direct qPCR Mix-SYBRнадається в коробці, може швидко іефективно отримувати кількісні дані в реальному часіРезультати ПЛР.
5× Direct RT Mix і 2× Direct qPCR Mix-SYBR мають сильну толерантність до інгібіторів і можуть використовувати лізат зразка для тестування як шаблон для ефективної зворотної транскрипції та специфічної ампліфікації.Реагент містить унікальну зворотну транскриптазу Foregene з високою спорідненістю до РНК, а також ДНК-полімеразу Hot D-Taq, dNTPs, MgCl2 , реакційний буфер, оптимізатор і стабілізатор ПЛР і може використовуватися в поєднанні з буфером лізису для швидкого, легкого і точного виявлення зразка, і він має характеристики високої чутливості, високої специфічності та хорошої стабільності.
Набір спрямований на мікросистемний лізис 96-лункових культивованих клітин і має хорошу однорідність і консистенцію;Компоненти набору забезпечують 96 реакцій лізису, 96 реакцій зворотної транскрипції та 96×2 реакцій qPCR, які можуть відповідати 96-лунковому планшету для одноразового використання, уникаючи забруднення, спричиненого повторним відкриттям, заморожуванням і розморожуванням реагентів і погіршенням продуктивності реагентів.
Компоненти набору
| Склад комплекту ( 50 μL lysis system/20 мклRT система реакції /20μL реакційна система qPCR) | ДРТ-03011 | Зауваження | |
| 96T | |||
| частинаI | БуферCL | 5 мл | СтільниковийЛізис |
| ForegeneПротеаза плюс II | 100 μL | ||
| БуферST | 500 μL | ||
| частина II | ДНКГумка | 100 μL | |
| 5× Direct RT Mix | 400 μL | RT | |
| 2× Пряма суміш qPCR-СИБР | 1 мL × 2 | КПЦР | |
| 50 × еталонний барвник ROX | 400мкл | ||
| РНКаза- безкоштовноddH2 O | 1,7 мл |
| |
| Mрічний | 1 шматок | 1 порція | |
*: Реагент для лізису DNA Eraser входить до частини II набору;Компоненти Cell Lysis, RT і qPCR можна придбати окремо.
Особливості та переваги
■Простий і ефективний: за допомогою технології Cell Direct RT зразки РНК можна отримати всього за 7 хвилин.
■ Попит на вибірку невеликий, можна протестувати лише 10 клітин.
■ Висока продуктивність: він може швидко виявляти РНК у клітинах, культивованих у 384, 96, 24, 12, 6-лункових планшетах.
■ DNA Eraser може швидко видаляти звільнені геноми, значно зменшуючи вплив на наступні експериментальні результати.
■ Оптимізована система RT-PCR робить двоетапну зворотну транскрипцію RT-PCR більш ефективною, а ПЛР більш специфічною та стійкою до інгібіторів реакції RT-PCR.
Аплікація комплекту
Сфера застосування: культивовані клітини.
- РНК, вивільнена в результаті лізису зразка: застосовується лише до матриці RT-qPCR цього набору.
- Набір можна використовувати для наступних цілей: аналіз експресії генів, перевірка ефекту глушіння генів, опосередкованого siRNA, скринінг ліків тощо.
Зберігання та термін придатності
Частина I цього набору повинна зберігатися в 4℃;Частина II повинна зберігатися при -20 ℃.
Foregene Protease Plus II слід зберігати при 4℃, не замерзати при -20 ℃.
Реагент 2×Direct qPCR Mix-Taqman слід зберігати при -20℃в темно;при частому використанні його також можна зберігати на 4℃ для короткочасного зберігання (використати протягом 10 днів).
Принципи розробки праймерів ПЛР у реальному часі
Прямий і зворотний буквари
Для ПЛР у реальному часі дизайн праймера дуже важливий.Праймери пов’язані зі специфічністю та ефективністю ПЛР-ампліфікації та можуть бути розроблені з посиланням на такі принципи:
- Довжина грунтовки: 18-30 п.н.
- Вміст ГХ: 40-60%.
- Значення Tm: програмне забезпечення для розробки праймера, наприклад Primer 5, може надати значення Tm праймера.Значення Tm перших і наступних праймерів повинні бути якомога ближчими.Також можна використовувати формулу розрахунку Tm: Tm = 4 °C (G + C) + 2 °C (A + T).Під час проведення ПЛР температуру нижче значення Tm праймера 5 °C зазвичай вибирають як температуру відпалу (відповідне підвищення температури відпалу може збільшити специфічність реакції ПЛР).
- Праймери та продукти ПЛР:
- Довжина продукту ПЛР-ампліфікації праймеру переважно становить 100-150 bp.
- Наскільки це можливо, слід уникати дизайнерських праймерів у вторинній структурній зоні шаблону.
- Уникайте утворення 2 або більше комплементарних основ між 3'-кінцями верхнього та нижнього за течією праймерів.
- Основа грунтовки 3' не може бути присутня з 3 додатковими послідовними G або C.
- Самі праймери не можуть мати комплементарних структур, інакше утворюється шпилькова структура, яка впливає на ПЛР-ампліфікацію.
- ATCG слід розподілити якомога рівномірніше в послідовності праймерів, і слід уникати 3' кінцевої основи, оскільки T.
Додаток1: Cell DirectRT-qPCR Компонент комплектуt пакет добавок
1. Розчин для лізису клітин
| Розчин для лізису клітин | |||
| Компоненти набору (24-лункова система лізису/лунка) | DRT-01011-A1 | DRT-01011-A2 | |
| 100 т | 500 т | ||
| частиная | Буфер CL | 20 мл | 100 мл |
| Foregene Protease Plus II | 400 мкл | 1 мл × 2 | |
| Буфер ST | 1 мл × 2 | 10 мл | |
| частинаII | Ластик ДНК | 400 мкл | 1 мл × 2 |
| RT Mix | |
| Компоненти набору (20 мкл реакційна система) | DRT-01011-B1 |
| 200 т | |
| 5× Direct RT Mix | 800 мкл |
| ddH без РНКази2O | 1,7 мл × 2 |
| qPCR Mix | ||
| Компоненти набору (20 мкл реакційна система) | DRT-01021-C1 | DRT-01021-C2 |
| 200 т | 1000 т | |
| 2× Direct qPCR Mix-Taqman | 1 мл × 2 | 1,7 мл × 6 |
| 20 × еталонний барвник ROX | 40 мкл | 200 мкл |
| ddH без РНКази2O | 1,7 мл | 10 мл |
Інструкції з експлуатації:
