Plant Total RNA Isolation Kit Plus Total RNA Purificaiton Kit для рослин, багатих полісахаридами та поліфенолами
Опис набору:
Кат.№RE-05021/05022/05024
Для очищення загальної РНК із звичайних рослинних зразків, що містять високий вміст полісахаридних і поліфенольних компонентів.
Швидко витягуйте високоякісну сумарну РНК із зразків рослин з високим вмістом полісахаридів і поліфенолів.
Без РНКази за допомогою колонки для очищення ДНК
Простий — усі операції виконуються при кімнатній температурі
Швидко — операцію можна завершити за 30 хвилин
Безпечно — не використовуються органічні реагенти 
Технічні характеристики
50 Preps, 200 Preps
У наборі використовується спінова колонка та формула, розроблені Foregene, які можуть ефективно витягувати високочисту та високоякісну загальну РНК із різних рослинних тканин із високим вмістом полісахаридів або поліфенолів.Він забезпечує колонку для очищення ДНК, яка може легко видалити геномну ДНК із супернатанту та тканинного лізату.Колонка лише з РНК може ефективно зв’язувати РНК.Набір може обробляти велику кількість зразків одночасно.
Вся система не містить РНКази, тому очищена РНК не буде розкладатися.Буфер PRW1 і буфер PRW2 гарантують, що отримана РНК не забруднена білком, ДНК, іонами та органічними сполуками.
Компоненти набору
| Буфер PSL1, Буфер PS, Буфер PSL2 |
| Буфер PRW1, буфер PRW2 |
| ddH без РНКази2О, колонка очищення ДНК |
| Колонка лише РНК |
Особливості та переваги
■ Робота при кімнатній температурі (15-25 ℃) протягом усього процесу, без крижаної бані та низькотемпературного центрифугування.
■ Повний комплект Не містить РНКази, не потрібно турбуватися про деградацію РНК.
■ Особливо підходить для очищення РНК із зразків рослин від полісахаридів і поліфенолів.
■ DNA-Cleaning Column спеціально зв’язується з ДНК, тому набір може видалити забруднення геномної ДНК без додавання ДНКази.
■ Високий вихід РНК: колонка лише для РНК і унікальна формула можуть ефективно очищати РНК.
■ Швидка швидкість: проста в експлуатації та може бути виконана протягом 30 хвилин.
■ Безпека: органічні реагенти не потрібні.
■ Висока якість: очищені фрагменти РНК мають високу чистоту, не містять білків та інших домішок і можуть відповідати різноманітним експериментальним застосуванням.
Параметри продукту
■ Додаткові програми: синтез кДНК першого ланцюга, RT-PCR, молекулярне клонування, Норзерн-блот тощо.
■ Зразок: свіжі або заморожені рослинні тканини полісахаридів і поліфенолів
■ Дозування: 50 мг рослинної тканини
■ Максимальна здатність до зв’язування РНК колонки для очищення: 80 мкг
■ Об'єм елюції: 50-200 мкл
Аплікація комплекту
Він підходить для екстракції та очищення загальної РНК зі свіжих або заморожених зразків рослинної тканини (особливо свіжої тканини листя рослин) з високим вмістом полісахаридів і поліфенолів.
Потік роботи
Діаграма
Plant Total RNA Isolation Kit Plus обробив 50 мг свіжого листя полісахаридів і поліфенолів, а 5% очищену РНК перевірили за допомогою електрофорезу.
1: Банан
2: Гінкго
3: Бавовна
4: Гранат
Зберігання та термін придатності
Цей набір можна зберігати протягом 24 місяців у сухих умовах при кімнатній температурі (15-25 ℃);якщо його потрібно зберігати довше, його можна зберігати при 2–8 ℃.
Буфер PSL1 можна помістити при 4 ℃ протягом 1 місяця після додавання β-меркаптоетанолу (рекомендується додавати його під час експерименту).
Колонка заглушена
Після закупорки колонки вихід РНК знижується або навіть неможливо очистити РНК, а отримана маса РНК є низькою.
Аналіз поширених причин:
1. Розриви вибірки не є повними.
Порушення зразка не призводить до повного блокування колонки для очищення ДНК, але впливає на вихід та якість РНК.Ми рекомендуємо операцію швидкого подрібнення в достатній кількості рідкого азоту, коли ви зламали зразки. Спробуйте розчавити клітинну стінку зразка, клітинну мембрану та іншу тканину.Для рослинних зразків поліольних полісахаридів ми рекомендуємо використовувати НАБІР ДЛЯ ІЗОЛЯЦІЇ РОНКОВОЇ РНК ПЛЮС.
2. Під час відсмоктування відокремленого супернатанту зразка за допомогою колонки для очищення ДНК можна вдихнути можливий фрагментований клітинний осад.
Взяті клітинні фрагментовані осади призведуть до створення колонки РНК-ЛИШЕ, яка буде заблокована під час виконання операції адсорбції РНК (див. крок 6).Ми рекомендуємо вам обережно відсмоктувати цей супернатант, щоб уникнути всмоктування залишків клітин.
3. Початкова кількість зразка занадто велика.
Надмірне використання зразка призведе до неповної фрагментації зразка або неповного лізису клітин буфером PSL1, що призведе до блокування очисної колонки під час очищення.Набір для виділення тотальної РНК рослин Кожна окрема очищена операційна проба становить 50 мг.Для рослинних зразків поліольних полісахаридів ми рекомендуємо вам спробувати НАБІР ДЛЯ ІЗОЛЯЦІЇ РОНКОВОЇ РНК ПЛЮС.
4. Температура центрифуги занадто низька.
Весь процес виділення та очищення РНК проводять при кімнатній температурі (20-25°C), за винятком того, що зразок тканини розбивається рідким азотом. Температура деяких кріогенних центрифуг нижче 20℃, що може спричинити блокування колонки для очищення ДНК та/або колонки лише з РНК.Якщо це сталося, встановіть температуру центрифуги 20-25℃, іпереконайтеся, що суміш для лізису та/або супернатант з додаванням етанолу попередньо нагріли до 37°C.
РНК не екстрагується або вихід РНК низький
Зазвичай існує багато факторів, які впливають на ефективність відновлення, наприклад: вміст РНК зразка, метод роботи, об’єм елюції тощо.
Нижче наведено аналіз поширених причин:
1. Під час операції було проведено центрифугування на крижаній бані або при низькій температурі (4°C).
Рекомендація: працювати при кімнатній температурі (15-25°C) у всьому процесі не використовуйте крижану баню та низькотемпературне центрифугування.
2. РНК була деградована внаслідок неправильного зберігання зразка або тривалого зберігання зразка.
Рекомендація: свіжозібрані зразки слід швидко заморозити в рідкому азоті, а потім зберігати при -80°C протягом тривалого часу, уникати повторного заморожування та розморожування зразків;або негайно замочіть зразки в розчині стабілізатора РНК RNAlater (зразки тварин).
3. Недостатня фрагментація зразка та лізис призводять до блокування очисної колонки.
Порада: під час подрібнення тканини переконайтеся, що тканина достатньо подрібнена, і швидко перемістіть її в попередньо підготовлений буфер PSL1 (підтвердьте, що додано правильну пропорцію β-ME, див. крок 1 процедури).
4. Елюент було додано неправильно.
Пропозиція: переконайтеся, що ddH2O, вільний від РНКази, капає в середину мембрани очисної колонки.
5. У буфер PSL2 або буфер PRW2 не було додано правильний об’єм абсолютного етанолу.
Пропозиція: будь ласка, дотримуйтесь інструкцій, додайте правильний об’єм абсолютного етанолу в буфер PSL2 і буфер PRW2 і добре перемішайте перед використанням набору.
6. Кількість зразка тканини є невідповідною.
Рекомендація: використовуйте 50 мг тканини на 500 мкл буфера PSL1.Використання занадто великої кількості тканини зменшить кількість екстрагованої РНК, і чистота отриманої РНК також буде знижена.Ми наполегливо рекомендуємо, щоб початкова доза зразка не перевищувала 50 мг на операцію екстракції РНК.
7. Невідповідний об’єм елюювання або неповне елюювання.
Пропозиція: Об’єм елюенту очисної колонки становить 50-200 мкл;якщо ефект елюції незадовільний, рекомендується продовжити час при кімнатній температурі після додавання попередньо нагрітого ddH2O без РНКази, наприклад, 5-10 хв.
8. Очисна колонка має залишок етанолу після промивання буфером PRW2.
Порада: якщо порожню пробірку центрифугують протягом 1 хвилини, і після промивання в буфері PRW2 все ще залишається етанол, ви можете збільшити час центрифугування порожньої пробірки до 2 хвилин або помістити колонку для очищення при кімнатній температурі на 5 хвилин, щоб повністю видалити залишки етанолу.
9. Набір використовувався неправильно.
Порада: для рослинних зразків поліфенольних полісахаридів за допомогою звичайних наборів, таких як набір для виділення загальної РНК рослин, можливо, не вдасться отримати ідеальні зразки РНК.Ми рекомендуємо вам використовувати Plant Total RNA IsolationKit Plus, який спеціально розроблений для рослинних зразків поліфенольних полісахаридів.Набір, спеціально розроблений для вилучення РНК із рослинних зразків поліфенолів і полісахаридів.
Значення OD260/OD280 низьке
Елюція РНК ddH2O та використання її для вимірювання спектрофотометра призводить до низьких значень OD260/OD280.Ми рекомендуємо використовувати 10 мМ Tris-HCl, pH 7,5 (замість ddH2O без РНКази для елюції РНК), щоб отримати відносно точні значення OD260/OD280, див. «Аналіз концентрації та очищення РНК» на сторінці 19.
Очищена РНК розкладається
Якість очищеної РНК залежить від таких факторів, як збереження зразка, забруднення РНКазою та маніпуляції.
Аналіз поширених причин:
1. Зразки тканин не зберігалися вчасно після збору.
Рекомендація: якщо зразки тканин не були використані вчасно після збору, будь ласка, негайно зберігайте їх у рідкому азоті при низькій температурі або перенесіть їх до -80°C для тривалого зберігання після швидкого заморожування в рідкому азоті, або негайно занурте зразки в розчин стабілізатора РНК RNAlater (зразки тварин).Для екстракції РНК спробуйте використовувати свіжозібрані зразки тканин.
2.Повторне заморожування та відтавання зразків тканин.
Порада: при зберіганні зразків тканин найкраще розрізати їх на невеликі шматочки для збереження та вийняти їх частину під час використання, щоб уникнути деградації РНК, спричиненої повторним заморожуванням і розморожуванням зразків.
3. РНКазу вводять в операційній або не надягають одноразові рукавички, маски тощо.
Пропозиція: Експерименти з екстракції РНК найкраще проводити в окремих операціях РНК, а лабораторний стіл слід очистити перед експериментом, а під час експерименту слід носити одноразові рукавички та маски, щоб уникнути деградації РНК, спричиненої введенням РНКази найбільшою мірою.
4. Реагент забруднений РНКазою під час використання.
Пропозиція: замініть на нову серію наборів для екстракції загальної РНК рослин для відповідних експериментів.
5. Центрифужні пробірки та наконечники піпеток, які використовуються для обробки РНК, забруднені РНКазою.
Пропозиція: переконайтеся, що центрифужні пробірки, наконечники піпеток, піпетки тощо, які використовуються для екстракції РНК, не містять РНКази.
Інструкції з експлуатації:
Plant Total RNA Isolation Kit Plus Інструкція з експлуатації
