Керівництво з аналізу проблем

The following is an analysis of the problems that may be encountered in the extraction of plant genomic DNA, hoping to be helpful to your experiments. In addition, for other experimental or technical problems other than operation instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. If you have any needs, please contact us: 028-83360257 or E-mali: Tech@foregene.com.

Низький вихід або відсутність ДНК

Зазвичай існує багато факторів, які впливають на вихід геномної ДНК, включаючи джерело зразка, вік зразка, умови зберігання зразка та операцію.

Під час екстракції не вдалося отримати геномну ДНК

1. Зразки тканин неправильно зберігаються або зберігаються надто довго, що призводить до деградації геномної ДНК.

Рекомендація: Зберігайте зразки тканин у рідкому азоті або -20°C;спробуйте використати щойно зібрані зразки для виділення геномної ДНК.

2. Занадто мала кількість зразка може призвести до того, що відповідна геномна ДНК не буде вилучена.

Пропозиція: для зразків тканини, які зберігалися протягом тривалого часу або мають серйозну деградацію геномної ДНК, кількість зразків тканини можна відповідно збільшити, щоб отримати значну кількість геномної ДНК.Кількість зразка можна визначити відповідно до потреб ДНК, але свіжий зразок не повинен перевищувати 100 мг, а сухий - 30 мг.

3. Зразок не подрібнюють рідким азотом або не залишають надовго після рідкого азоту.

Пропозиція: під час екстракції ДНК зразок потрібно повністю подрібнити рідким азотом, щоб розбити клітинну стінку;після подрібнення перенесіть зразок порошку в PL1, попередньо нагрітий до 65°C якнайшвидше (як тільки мелений порошок розплавиться, геномна ДНК почне швидко деградувати).

4. Неправильне зберігання Foregene Protease призводить до зниження або інактивації активності.

Рекомендація: перевірте умови зберігання Foregene Protease або замініть її новою Foregene Protease для ферментативного гідролізу.

5. Набір зберігається неправильно або зберігається надто довго, що спричиняє вихід з ладу деяких компонентів набору.

Рекомендація: придбайте новий набір для екстракції геномної ДНК рослин для відповідних операцій.

6. Неправильне використання комплекту.

Пропозиція: придбайте набір для виділення ДНК рослин, призначений для зразків для виділення та очищення геномної ДНК рослин.

7. Буфер WB без додавання aбезводний етанол.

Рекомендація: переконайтеся, що додали правильний об’єм абсолютного етанолу в буфер WB.

8. Елюент неправильно капнув на силікатну мембрану.

Пропозиція: додайте попередньо нагрітий елюент при 65℃краплями до середини силікагелевої мембрани та залиште при кімнатній температурі на 5 хвилин, щоб підвищити ефективність елюювання.

Екстракція для отримання геномної ДНК з низьким виходом

1. Зразок зберігається неправильно або зберігається занадто довго, що призводить до деградації геномної ДНК.

Рекомендація: Зберігайте зразки тканин при -20℃;спробуйте використати щойно зібрані зразки тканини для виділення геномної ДНК.

2. Якщо кількість зразків тканини занадто мала, виділена геномна ДНК буде меншою.

Пропозиція: Деякі зразки рослин багаті водою, наприклад, водні рослини, такі як водорості тощо, дозу можна відповідно збільшити або воду можна трохи зневоднити перед операцією.

3. Зразки не були ретельно подрібнені рідким азотом або залишалися при кімнатній температурі занадто довго після подрібнення.

Пропозиція: Подрібнення рідким азотом має бути достатнім, а клітинна стінка зразка повинна бути максимально розбита;відразу після подрібнення зразок порошку слід перенести в 65℃попередньо нагрітий буфер PL1 для наступного кроку.

4. Не використовується належний комплект.

Рекомендація: використовуйте спеціальний набір для виділення ДНК рослин для виділення та очищення геномної ДНК рослин.

5. Неналежне зберігання Foregene Protease призводить до зниження або інактивації активності.

Рекомендація: перевірте умови зберігання Foregene Protease або замініть її новою Foregene Protease для ферментативного гідролізу.

6. Проблема елюенту

Рекомендація: будь ласка, використовуйте буфер EB для елюції;якщо використовується ddH₂O або інші елюенти, переконайтеся, що рН елюенту становить 7,0-8,5.

7. Елюент капає неправильно

Пропозиція: будь ласка, додайте краплю елюювача в середину силікатної мембрани та залиште її при кімнатній температурі на 5 хвилин, щоб підвищити ефективність елюювання.

8. Об’єм елюенту занадто малий

Пропозиція: використовуйте елюент для елюції геномної ДНК відповідно до інструкцій, принаймні не менше 100мкл.

Екстрагована геномна ДНК низької чистоти

Низька чистота геномної ДНК призведе до невдачі або поганого ефекту подальших експериментів, таких як: фермент не можна розрізати, а цільовий фрагмент гена неможливо отримати за допомогою ПЛР.

1. Різні білкові забруднення, забруднення РНК.

Аналіз: Буфер PW не використовувався для промивання колонки;Буфер PW не використовувався для промивання колонки при правильній швидкості центрифугування.

Пропозиція: спробуйте переконатися, що в супернатанті немає осаду, коли супернатант пропускають через колонку;обов’язково промийте очисну колонку буфером PW відповідно до інструкцій, і цей крок не можна пропускати.

2. Забруднення домішковими іонами.

Аналіз: Промивна колонка Buffer WB була пропущена або промита лише один раз, що призвело до залишкового іонного забруднення.

Рекомендація: обов’язково двічі промийте Buffer WB відповідно до інструкцій, щоб максимально видалити залишкові іони.

3. Зараження РНКазою.

Аналіз: екзогенна РНКаза додається до буфера;неправильна операція промивання в буфері PW призведе до залишкової РНКази та вплине на експериментальні операції РНК нижче за течією, такі як транскрипція in vitro.

Пропозиція: Набори для екстракції нуклеїнової кислоти серії Foregene можуть видаляти РНК без додаткової РНКази, а всі реагенти в наборі для виділення ДНК рослин не потребують РНКази;обов’язково промийте очисну колонку буфером PW відповідно до інструкцій, і цей крок не можна пропускати.

4. Залишки етанолу.

Аналіз: Після промивання колонки для очищення буфером WB центрифугування порожніх пробірок не проводилося.

Рекомендація: дотримуйтесь інструкцій щодо правильного центрифугування порожніх пробірок.

Посібник з експлуатації:

Інструкція з використання набору для виділення ДНК рослин