Набір для виявлення нуклеїнової кислоти Escherichia coli O157:H7 (метод ПЛР з флуоресцентним зондом)
Опис набору:
кат.№FP102
Він використовується для швидкого виявлення та скринінгу кишкової палички O157:H7 у пробах харчових продуктів, кормів, води та навколишнього середовища.
Описи
Він використовується для швидкого виявлення та скринінгу кишкової палички O157:H7 у зразках харчових продуктів, кормів, води та навколишнього середовища.
[Принцип тестування]Відповідно до принципу технології флуоресцентної ПЛР, спеціальні праймери та зонди Taqman розроблені для конкретного гена Escherichia coli O157: H7 і виявляються флуоресцентним приладом ПЛР, щоб реалізувати виявлення Escherichia coli O157: H7 Якісне виявлення ДНК.
Вміст набору
Примітка: датчик каналу ROX не входить у комплект.
| Cкомпоненти | Специфікація | Quantity |
| Буфер А | трубка | 1 |
| Буфер Б | трубка | 1 |
| Позитивний контроль | трубка | 1 |
| Негативний контроль | трубка | 1 |
Очікуване використання
Використовується для швидке виявлення та скринінг кишкової палички O157:H7 у пробах харчових продуктів, кормів, води та навколишнього середовища.
Умови зберігання та термін придатності
Зберігати при -20 ℃ у темряві та уникати повторного заморожування та розморожування.
Термін дії 12місяців, а дата виробництва вказана на зовнішній упаковці.
Інструменти та витратні матеріали
Флуоресцентний прилад для кількісної ПЛР, піпетка та відповідні наконечники, вихровий шейкер, мініцентрифуга.
Використання
1. Обробка зразків
1.1 Тип зразка: цей набір підходить для зразків харчових продуктів, кормів, води та інших проб, підозрюваних на зараження Escherichia coli O157:H7.М’ясні продукти глибокої обробки, напої та інші речовини, що містять пігменти, необхідно промити, щоб уникнути впливу на збір флуоресцентних сигналів.
1.2 Обробка зразків: дивіться «GB 4789.10-2016 Національний стандарт харчових мікробіологічних досліджень кишкової палички Escherichia coli O157: тест H7» щодо підготовки зразків, збагачення культури та виділення Escherichia coli O157: H7.
- Nекстракція уклеїнової кислоти
Візьміть 20 мл збагачувального розчину в центрифужну пробірку на 1,5 мл, додайте 200 мкл мікробного лізату (потрібен додатковий набір), перемішайте протягом 30 секунд, ненадовго відцентрифугуйте та відставте.
Примітки: екстракція нуклеїнової кислоти з лізату повинна бути завершена протягом 10 хвилин, і не може зберігатися протягом тривалого часу.
3. Ампліфікація нуклеїнових кислот
3.1 Увімкніть флуоресцентний прилад для кількісної ПЛР для використання.
Буфер A і буфер B з набору, ретельно розтопіть їх і ненадовго відцентрифугуйте.Додайте 18 мкл буфера A та 2 мкл буфера B у кожну пробірку для реакції ПЛР.Потім додайте по 5 мл кожного негативного контролю, екстрагованої нуклеїнової кислоти та позитивного контролю в пробірки для реакції ПЛР, закрийте пробірки кришками та коротко відцентрифугуйте.
3.3 Перенесіть реакційну пробірку для ПЛР у флуоресцентний апарат для ПЛР і виконайте такі процедури для проведення експериментів з ампліфікацією: виберіть 25 мл для реакційної системи, зберіть сигнали флуоресценції при 60°C для кожного циклу та виберіть FAM для каналу виявлення.
| Крок | програма | Кількість циклів |
| 1 | 37 ℃ 5 хв | 1 |
| 2 | 9 5 ℃ 3 хв | 1 |
| 3 | 95°C 15 с | 4 0 |
| 60 ℃ 30 с (збір флуоресценції) |
Посібники для аналізу проблем
The following is an analysis of the problems that might be encountered in the extraction of viral RNA. We wish it would be helpful to your experiment. In addition, for other experimental or technical problems other than operating instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. Contact us if you need at : 028-83361257or E-mail：Tech@foregene.com。
Неможливо виділити РНК або вихід нуклеїнової кислоти низький
Зазвичай існує багато факторів, які впливають на ефективність відновлення, наприклад: вміст РНК зразка, метод роботи, об’єм елюції тощо.
Аналіз поширених причин:
1. Крижана ванна або низькотемпературне (4 ° C) центрифугування під час роботи.
Рекомендація: робота при кімнатній температурі (15-25 °C), ніколи не використовувати крижану ванну та низькотемпературну центрифугу.
2. Неправильне зберігання зразка або занадто тривале зберігання зразка.
Рекомендація: Зберігайте зразки при -80 °C або заморожуйте їх у рідкому азоті та уникайте повторного заморожування-розморожування;спробуйте використовувати свіжозібрані зразки для виділення РНК.
3. Недостатній лізис зразка
Рекомендація: Будь ласка, переконайтеся, що зразок і робочий розчин (лінійний акриламід) були ретельно перемішані та інкубовані протягом 10 хвилин при кімнатній температурі (15-25 ° C)
4. Елюент було додано неправильно
Рекомендація: переконайтеся, що ddH2O без РНКази додано до середини мембрани очисної колонки
5. Невідповідний об’єм безводного етанолу в буфері viRW2
Пропозиція: будь ласка, дотримуйтесь інструкцій, додайте правильний об’єм безводного етанолу до буфера viRW2 і добре перемішайте їх перед використанням набору.
6.Неналежне використання зразка.
Рекомендація: 200 мкл зразка на 500 мкл буфера viRL.Надмірний об’єм зразка призведе до зниження швидкості екстракції РНК.
7. Невідповідний об’єм елюювання або неповне елюювання.
Пропозиція: об’єм елюенту колонки для очищення становить 30-50 мкл;якщо ефект елюції незадовільний, рекомендується додати попередньо нагрітий ddH без РНКази2O та подовжте час, помістивши при кімнатній температурі, наприклад, на 5-10 хв
8. Очисна колонка має залишок етанолу після промивання в буфері viRW2.
Пропозиція: якщо етанол все ще залишається після промивання в буфері viRW2 і центрифугування в порожній пробірці протягом 2 хвилин, колонку для очищення можна залишити при кімнатній температурі на 5 хвилин після центрифугування в порожній пробірці, щоб повністю видалити залишки етанолу.
Деградація очищених молекул РНК
Якість очищеної РНК залежить від таких факторів, як зберігання зразка, забруднення РНКазою та експлуатація.
Аналіз поширених причин:
1. Зібрані зразки не були вчасно збережені.
Порада: якщо зразок не використано вчасно після збору, негайно зберігайте його при -80 ℃ або в рідкому азоті.Для екстракції молекул РНК намагайтеся використовувати свіжозібрані зразки, коли це можливо.
2. Зібрані зразки неодноразово заморожувалися та відтавали.
Порада: уникайте повторного заморожування та розморожування (не більше одного разу) під час відбору та зберігання зразка, інакше вихід нуклеїнової кислоти зменшиться.
3.РНКазу вводили в операційній або не використовували одноразові рукавички, маски тощо.
Порада: Експеримент з екстракцією молекул РНК найкраще проводити в окремій операційній РНК, а експериментальний стіл перед експериментом прибирати.Одягайте одноразові рукавички та маски під час експерименту, щоб уникнути деградації РНК, спричиненої введенням РНКази.
4. Реагент забруднений РНКазою під час використання.
Пропозиція: замініть на новий набір для виділення вірусної РНК для відповідних експериментів.
5. Забруднення центрифужних пробірок, наконечників піпеток тощо РНКазою. Пропозиція: переконайтеся, що центрифужні пробірки, наконечники піпеток і піпетки не містять РНКази.
Очищені молекули РНК вплинули на подальші експерименти
Молекули РНК, очищені очисною колонкою, впливатимуть на подальші експерименти, якщо буде занадто багато іонів солі або білків, наприклад: зворотна транскрипція, Норзерн-блот тощо.
1. У елюованих молекулах РНК залишилися іони солі.
Рекомендація: переконайтеся, що до буфера viRW2 було додано потрібний об’єм безводного етанолу, і двічі промийте колонку для очищення відповідно до правильної швидкості центрифугування, зазначеної в інструкціях з експлуатації; якщо все ще залишаються іони солі, ви можете додати буфер viRW2 до колонки для очищення та залишити її при кімнатній температурі на 5 хвилин.Потім виконайте центрифугування, щоб максимально видалити забруднення іонами солі
2. В елюованих молекулах РНК залишився етанол
Порада: переконавшись, що колонки для очищення промито буфером viRW2, виконайте центрифугування в порожніх пробірках відповідно до відцентрової швидкості, зазначеної в інструкції з експлуатації.Якщо все ще залишився етанол, його можна залишити на 5 хвилин при кімнатній температурі після центрифугування в порожній пробірці, щоб максимально видалити залишки етанолу.
Інструкції з експлуатації:
Інструкція з використання набору для виділення вірусної РНК
