Низьке співвідношення A260/A230 зазвичай спричинене домішками з максимальною довжиною хвилі поглинання при 230 нм.Давайте подивимося, що включають ці домішки:

• Загальні забруднювачі	Довжина хвилі поглинання	Ефект співвідношення
  білок	~230 нм і 280 нм	Одночасне скорочення А260/A 280і А260/A 280співвідношення
  Гуанідінова сіль	220-240 нм	Зменшити А260/A 280співвідношення
  Фенол	~270 нм	-
  Тризол	~230 нм і 270 нм	Зменшити А260/A 280співвідношення
  EDTA	~230 нм	Зменшити А260/A 280співвідношення
  Етанол	230-240 нм	Зменшити А260/A 280співвідношення

 
 
 
Довжина хвилі поглинання та значення контрасту звичайних забруднюючих речовин

Pзабруднення ротоїдом
Білкове забруднення можна вважати найпоширенішим забрудненням у процесі екстракції нуклеїнових кислот.Білок знаходиться між верхньою водною фазою і нижньоюорганічніфаза .Забруднення водночас зменшить співвідношення A260/A280 і A260/A230, і співвідношення A260/A230 зміниться більш очевидно, ніж співвідношення A260/A280.
Під час наступнихзворотна транскрипціяor qPCR реакції, білкові залишки можуть пригнічувати або перешкоджати функціонуванню ферменту.Найкращий спосіб уникнути забруднення протеїном — пам’ятати про принцип «радше менше, ніж більше, невелика кількість багато разів» під час аспірації супернатанту.

2. Забруднення гуанідінієм
гідрохлорид (GuHCl) і тіоціанат гуанідину (GTC) мають ефект денатурації білків, які можуть швидко руйнувати клітинні мембрани під час процесу екстракції нуклеїнової кислоти, викликаючи денатурацію білка та випадання в осад.Довжина хвилі поглинання GuHCl і GTC становить 220-240 нм, азалишкова сіль гуанідинію зменшить співвідношення A260/A230.Хоча залишкова сіль гуанідинію зменшить співвідношення,вплив на подальші експерименти фактично незначний.

3. Зараження трізолем
Основним компонентом Тризол є фенол.Основною функцією фенолу є лізис клітин і вивільнення білків і речовин нуклеїнових кислот у клітинах.Хоча фенол може ефективно денатурувати білки, він не може повністю інгібувати активність РНКази.Тому до TRIzol додають 8-гідроксихінолін, гуанідинізотіоціанат, β-меркаптоетанол тощо для інгібування ендогенної та екзогенної РНКази.
При екстракції клітинної РНК Тризол може швидко лізувати клітини та інгібувати нуклеазу, що вивільняється з клітин, а залишковий Тризол значно знизить співвідношення A260/A230.
Спосіб обробки: При центрифугуванні слід враховувати, що фенол у Тризолі легко розчинний у водній фазі за умови 4° і кімнатної температури.

4. Залишок етанолу
Етанол використовується в кінцевому процесі для осадження ДНК під час розчинення іонів солі, які можуть бути зв’язані з ДНК.Довжина хвилі поглинання найвищапік поглинанняетанол також при 230-240 нм, якийтакож зменшить співвідношення A260/A230.
Метод уникнення залишків етанолу можна повторити двічі під час остаточного елюювання, вдуваючивитяжна шафапротягом двох хвилин, щоб дозволити етанолу повністю випаруватися перед додаванням буфера для елюювання.
Однак слід знати, що коефіцієнт є лише оціночним показником якості РНК.Якщо вищезазначені операції суворо регламентовані, відхилення між співвідношенням і стандартним діапазоном не матиме великого впливу на подальші експерименти.
Супутні товари:
Набір для виділення тотальної РНК тварин
Набір для виділення тотальної РНК рослин
Набір для виділення тотальної РНК клітини
Набір для виділення тотальної РНК рослин Plus