Методи ПЛР і забруднення аерозолями нуклеїнових кислот в лабораторіях тестування нуклеїнових кислот — це як дві сторони медалі.Ми можемо лише вибрати мати його чи ні, але ми не можемо вибрати, хочемо його чи витрачаємо.

1. Скринінг засобу для видалення ДНК

Щоб досягти просторового видалення аерозольного забруднення нуклеїнової кислоти, спочатку необхідно відсіювати засоби для видалення ДНК, які можуть видаляти нуклеїнові кислоти в рідкому стані.Тому що не так багато засобів для видалення ДНК, які дійсно працюють.Для експериментального методу, будь ласка, зверніться до: Видалення ДНК не може бути «таємним куточком» лабораторії!

У цьому експерименті 100 копій/мкл (CT приблизно 31) плазміди ASFV та засобу для видалення ДНК, кількісно визначеного цифровою ПЛР, змішували в рівних об’ємах, а потім реагували при кімнатній температурі протягом 10 хвилин, 20 хвилин та 30 хвилин відповідно.Після екстракції нуклеїнової кислоти проводили ампліфікацію КПЦР.Порівнювали позитивний контроль, змішаний з плазмідою та водою.Оскільки експеримент не було завершено одночасно, між результатами може бути певне відхилення, але це не впливає на результат експерименту.Наразі я оцінив 10 комерційних продуктів для видалення ДНК.Тільки продукти № 1, № 6 і № 8 можуть ефективно розщеплювати плазмідну ДНК у рідкому стані.Інші продукти практично не діють.

Таблиця 1 Ефект видалення нуклеїнової кислоти комерційно доступним засобом для видалення ДНК

2. Експеримент з ефектом видалення ДНК широко використовуваних дезінфікуючих засобів

1. Скринінг широко використовуваних дезінфікуючих засобів

Існує багато типів дезінфікуючих засобів, які зазвичай використовуються в лабораторіях: альдегіди, феноли, спирти, солі четвертинного амонію, пероксиди, препарати хлору, а також кислоти та основи.Дезінфікуючу дію цих дезінфікуючих засобів на мікроорганізми було повністю підтверджено експериментами, але немає достатніх експериментальних даних щодо ефекту деградації нуклеїнових кислот.Лабораторіям тестування нуклеїнових кислот потрібен дезінфікуючий засіб, який не тільки має хорошу дезінфікуючу дію на мікроорганізми, але й може руйнувати ДНК.Результати випробувань показали, що вимогам відповідають лише два хлорпрепарати 84 дезінфікуючої та трихлорізоціанурової кислоти та 1 М соляної кислоти.Оскільки 1 М соляна кислота є сильно корозійною, рекомендується використовувати препарати хлору для утилізації відходів у лабораторіях тестування нуклеїнових кислот.Проте препарати хлору є корозійними для металів і не можуть використовуватися для дезінфекції інструментів та обладнання.

Таблиця 2 Ефекти видалення ДНК різними типами дезінфікуючих засобів

2. Мінімальна ефективна концентрація хлорних препаратів

Дезінфікуючі засоби на основі хлору мають сильний ефект деградації ДНК, але через їх корозійну активність і подразнення металу їх можна використовувати для миття підлоги, неметалевих стільниць, наконечників для замочування, центрифужних пробірок та інших предметів для тестування.

Згідно з «Новими технічними рекомендаціями щодо епідемічної дезінфекції коронарної пневмонії»: забруднювачі (кров пацієнтів, виділення та блювота) доступний хлор 5 г/л-10 г/л хлорвмісний дезінфікуючий засіб;на підлозі, стінах і поверхнях предметів використовуйте доступний хлор 1 г/л Хлорний дезінфікуючий засіб: одяг, постільну білизну та інший текстиль спочатку замочують у хлорному дезінфікуючому засобі з 0,5 г/л наявного хлору на 30 хвилин, а потім чистять, як зазвичай.

Таблиця 3 Ефект видалення ДНК різних концентрацій хлорного дезінфікуючого засобу

Результати тесту показують, що: коли ефективна концентрація хлору перевищує або дорівнює 1,2 г/л, хлорвмісний дезінфікуючий засіб може повністю розщепити 100 копій/мкл плазміди, якщо його використовувати протягом 5 хвилин.При дії протягом 10 хвилин дезінфектант 84 з ефективною концентрацією хлору, що перевищує або дорівнює 0,6 г/л, може повністю розкласти 100 копій/мкл плазмід.

3. Дослід з видалення повітря, забрудненого аерозолем нуклеїнової кислоти

Як очистити повітря, забруднене аерозолями нуклеїнових кислот?Більшість думок полягає в тому, щоб створити середовище, забруднене аерозолями, а потім очистити його, або очистити нуклеїнові кислоти після забруднення.Для мене не має сенсу експеримент, який неможливо повторити і результати експерименту не піддаються кількісному аналізу, тому я запозичив деякі способи дезінфекції повітря.Див. «Загальні вимоги GB27948-2020 до засобів для дезінфекції повітря» та «Технічні характеристики дезінфекції»

1. Контрольні матеріали

1.1 Засіб для видалення ДНК: у цьому експерименті було вибрано два комерційно доступні засоби для видалення ДНК 6 і 8 у таблиці 1.

1.2 Тестова плазміда: враховуючи, що значення CT більшості лабораторних забруднень буде вищим за 30, концентрація плазміди гена ASFV, використаної цього разу, становить приблизно 100 копій/мкл, а флуоресцентна кількісна ПЛР-КТ становить приблизно 31,07.Додайте плазміду до флокуючого ватного тампона та висушіть на повітрі.

1.3 Прилад для тестування. Прилад для дезінфекції Bilingkehan KVBOX, люб’язно підтриманий компанією Shenzhen Runlian Environmental Technology Co., Ltd., має чудову ефективність дезінфекції повітря за допомогою дезінфікуючого засобу перекисом водню та може ефективно знищувати спори та інші мікроорганізми.

1.4 Тестовий простір: закрите трансферне вікно близько 0,1 куб.

2. Метод випробування

Кількість дезінфікуючого засобу, встановленого на дезінфекційній машині, становить 10 мл, а концентрація – 100 мл/м3, що значно перевищує «Загальні вимоги GB27948-2020 до засобів для дезінфекції повітря»: при використанні аерозольного розпилювача кількість дезінфікуючого засобу має бути ≤10 мл/м3.