Вести

Довга некодуюча РНК, lncRNA — це некодуюча РНК довжиною понад 200 нуклеотидів, зазвичай між 200-100 000 нт.lncRNA регулює експресію генів на епігенетичному, транскрипційному та посттранскрипційному рівнях і бере участь у сайленсингу Х-хромосоми, імпринтингу генома та модифікації хроматину, активації транскрипції, інтерференції транскрипції, ядерному транспорті, регуляції клітинного циклу, регуляції клітинної диференціації та ефектах компенсації дози (ефект компенсації дози), а також у багатьох інших важливих процесах регуляції тісно пов’язаних із виникненням, розвитком та запобіганням людського захворювань, і в даний час є однією з гарячих точок у галузі біомедицини.

01  Типи та характеристики LncRNA

lncRNA поділяється на багато типів відповідно до різних джерел її утворення, як показано на малюнку вище.Має такі характеристики:

1. lncRNA зазвичай довші, з динамічною експресією та різними методами сплайсингу під час диференціювання
2. У порівнянні з кодуючими генами, lncRNA зазвичай має нижчий рівень експресії
3. Більшість lncRNA мають очевидну часову та просторову специфічність експресії в процесі тканинної диференціації та розвитку
4. Є характерні вирази при пухлинах та інших захворюваннях
5. Субклітинні локалізації lncRNA різноманітні
6. Послідовність має низький рівень збереження, але функція має певний ступінь збереження тощо.

02 Часті запитання про зворотну транскрипцію LncRNA

Через низький вміст lncRNA у клітинах, велику довжину та структуру високого рівня, така РНК часто має складні структури, такі як стовбурові петлі або шпильки, і RT-qPCR схильна до проблем невдалої зворотної транскрипції або низької ефективності.

03 Розчин зворотної транскрипції LncRNA

Згідно з основним правилом, процес, у якому РНК-віруси використовують власну зворотну транскриптазу для синтезу ДНК, використовуючи РНК як матрицю, називається зворотною транскрипцією.Процес використання зворотної транскриптази РНК-вірусу для синтезу матриці кДНК in vitro називається зворотною транскрипцією.Основні елементи, що входять до системи зворотної транскрипції: матриця РНК, зворотна транскриптаза, праймери та інші компоненти.

1. Шаблон РНК

Вплив матриці РНК на зворотну транскрипцію відображається на її структурі, чистоті та цілісності.Чим вище чистота і цілісність екстрагованої РНК, тим вище ефективність зворотної транскрипції і точніші подальші кількісні результати.РНК, очищена загальновживаними реагентами для екстракції РНК, часто містить залишки спирту та солей гуанідину, які мають сильний інгібуючий ефект на більшість зворотної транскриптази.

2. Зворотна транскриптаза

Зворотна транскриптаза має ключовий вплив на всю систему зворотної транскрипції.Відповідна температура для зворотної транскриптази, яка використовується в більшості лабораторій, зазвичай становить 42°C.Насправді відкриття високорівневої структури РНК вимагає більш високої температури, а вимоги до зворотної транскриптази вищі.

3.Буквар

Праймери зворотної транскрипції включають ген-специфічні праймери, випадкові праймери та праймери Oligo dT.Більшість lncRNA не містять хвостів polyA, тому важливо правильно зіставити випадкові праймери з Oligo dT.

4. Інші компоненти

З огляду на те, що РНК особливо легко деградувати, введення компонентів у систему зворотної транскрипції може бути зведено до мінімуму, що може ефективно запобігти проникненню РНКази та забезпечити плавний хід зворотної транскрипції.

Fорегенотримує з матриці РНК, зворотної транскрипції до КПЦР

Всебічний супровід виявлення вашої lncRNA

Загальна РНК тварин IсоляціяНабір (з колонкою для видалення гДНК)

Тотальна РНК клітини IсоляціяНабір (з колонкою для видалення гДНК)

Lnc-RT HeroTM I (з gDNase) (суперпремікс для синтезу кДНК першого ланцюга з lncRNA)

ПЛР у реальному часі EasyTM-SYBR Green I

Aпереваги ofекстракція РНК:

У наборі використовується технологія екстракції РНК третього покоління, немає необхідності використовувати ДНКазу.

11 хвилин з 96, 24, 12 і 6-лункових планшетів, культивованих клітин, високоефективна екстракція загальної клітинної РНК високої якості без гДНК.

Переваги зворотної транскрипції lncRNA:

Система зворотної транскрипції, спеціально розроблена для LncRNA для швидкого видалення забруднення геномної ДНК.

Система зворотної транскрипції має високу термічну стабільність і все ще має хороші показники зворотної транскрипції при 50°C.

Шаблони з високим вмістом GC і складною вторинною структурою можуть бути звернені з високою ефективністю.

Перевагиof qПЛР:

Гарячий старт Foregene Taq Polymerase має вищу ефективність ампліфікації, вищу чутливість ампліфікації та вищу специфічність ампліфікації

Завдяки оптимізованому Real PCR Easy Mix SYBR Green I має вищу чутливість виявлення, а його інтенсивність флуоресценції в 3-5 разів перевищує показники аналогічних продуктів, що може задовольнити потреби різних типів кількісних експериментів флуоресценції.