Встановіть SOP експерименту ПЛР, щоб стандартизувати поведінку персоналу експерименту.
Експериментатор суворо дотримується робочих процедур і мінімізує забруднення ПЛР, яке може бути спричинене людським фактором, або запобігає виникненню забруднення.Крім того, експериментатор повинен володіти відповідними професійними знаннями та навичками, включаючи вміння працювати з відповідним обладнанням, прояснити весь робочий процес, оволодіти методами обробки забруднення та методами лабораторного контролю якості, а також бути здатним правильно інтерпретувати результати тесту.
Створити стандартну ПЛР-лабораторію.
Лабораторія ПЛР розділена на чотири зони, а саме зону підготовки реагентів, зону обробки зразків, зону ампліфікації та зону аналізу продуктів ампліфікації.Перші дві зони є зонами попереднього підсилення, а останні дві – зонами після підсилення.Зона преампліфікації та зона постампліфікації повинні бути строго розділені.Експериментальні матеріали, реагенти, папір для записів, ручки, чистячі матеріали тощо можуть надходити лише із зони попередньої ампліфікації в зону після ампліфікації, тобто з зони підготовки реагентів → зони обробки зразка → зони ампліфікації → зони аналізу продуктів ампліфікації, і не повинні текти назад.Потік повітря в лабораторії також повинен текти від зони попередньої ампліфікації до зони після ампліфікації, а не текти назад.Ідеальний дизайн лабораторії ПЛР показано нижче:
Малюнок A: Ідеальний режим ПЛР-лабораторії з негативним тиском у буферній кімнаті
Рисунок B: Ідеальний режим ПЛР-лабораторії з позитивним тиском у буферній кімнаті
Схеми налаштування лабораторії ПЛР, наведені на рисунку A та малюнку B, мають бути більш ідеальним режимом налаштування, і лабораторія з умовами може використовувати цей режим для розробки.Для звичайних лабораторій рекомендується, щоб зони ПЛР-ампліфікації та зони аналізу продукту могли бути розділені, а відкриття кришки повинно бути якомога менше в зоні підготовки зразка та зоні ПЛР-ампліфікації.Пам’ятайте: суворо забороняється проносити продукти та експериментальні матеріали в зону аналізу продукції в зону підготовки зразків і зону ПЛР-ампліфікації.
Якщо лабораторія виконує тільки ПЛР-детектування та ідентифікацію, рекомендується використовувати флуоресцентну кількісну ПЛР замість звичайної ПЛР.
Результати кількісного ПЛР-детектування флуоресценції можна збирати та аналізувати за сигналами флуоресценції, тому немає необхідності відкривати кришку для електрофорезу після реакції, що дозволяє уникнути забруднення продукту ПЛР, спричиненого витоком продуктів реакції з утворенням аерозолів.Якщо ви збільшите кількість отворів ковпачка під час етапу завантаження гель-електрофорезу, ймовірно, станеться аерозольне забруднення.Рекомендується популяризувати застосування кількісної ПЛР і поступово замінювати якісну ПЛР.
Для ПЛР-реакції використовується система контамінації продукту UNG anti-PCR.
Система використовує dUTP замість dTTP.Після реакції ПЛР усі продукти ПЛР (фрагменти ДНК) об’єднуються з dUTP;у наступному раунді ПЛР-реакції фермент UNG, доданий до системи, інкубується при 37°C протягом 5 хвилин перед ПЛР, що може специфічно розщепити всі фрагменти ДНК, що містять dUTP, а потім провести реакцію ПЛР.Це може повністю видалити аерозольне забруднення, спричинене продуктами ПЛР.Ефект показано на малюнку нижче:
Примітка. Для прямої серії ПЛР ви можете вибрати продукти серії системи контамінації продуктів ПЛР ForegeneЗапропонуйте
Для лабораторій, які проводять широкомасштабне тестування генотипу, настійно рекомендується використовувати систему контамінації продуктів UNG проти ПЛР для тестування реагентів на додаток до будівництва відповідних лабораторій.
Нагадування: використання цієї системи не може видалити вже спричинене забруднення продукту ПЛР.Тому систему UNG слід використовувати на початку відповідного тесту, а систему UNG слід використовувати для ПЛР-ампліфікації, щоб запобігти зараженню продуктів ПЛР. Хибнопозитивний результат.
Рекомендується використовувати систему Direct PCR-UNG компанії Foregene при проведенні широкомасштабних тестувань, таких як:
Plant Leaf Direct PCR Kit-UNG；
Plant Seed Direct PCR Kit-UNG；
Animal Tissue Direct PCR Kit-UNG；
Mouse Tail Direct PCR Kit-UNG；
Набір Zebra Fish Direct PCR Kit-UNG.
Ця серія наборів від Foregeneможе не тільки виконувати ПЛР-детектування швидко та у великому масштабі, але й ефективно запобігати та контролювати забруднення продукту ПЛР.
Час публікації: 19 березня 2021 р
