Народження ПЛР
ПЛР（Полімеразна ланцюгова реакція）
З моменту винаходу полімеразної ланцюгової реакції минуло більше 30 років.Протягом більше 30 років, після того, як численні вчені в усьому світі продовжували доповнювати та вдосконалювати, технологія ПЛР стала найпоширенішим та найважливішим фундаментальним методом дослідження у всій галузі наук про життя.
TouchDown PCR, Real-Time PCR, Multi PCR тощо, розроблені на основі широкого застосування традиційної технології ПЛР, а також нещодавно з’явилася Digital PCR (цифрова ПЛР), значно збагатили методи дослідження більшості наукових дослідників і значно прискорили процес розвитку сучасних наук про життя, особливо молекулярної біології, зробили великий внесок у вивчення життя та природи людства в цілому.
Недоліки традиційної технології ПЛР
Складне поділ нуклеїнових кислот івидобуток:
★ Традиційна технологія ПЛР: обов’язкова
★ Технологія ПЛР: обов’язкова
★ Зразки ДНК і РНК: великі відмінності, складні вимоги до роботи
★ Небезпека для організму: токсичні реагенти завдають шкоди організму
Традиційна ПЛР-технологія та похідна технологія мають обов’язкову умову – розділення та очищення нуклеїнових кислот
Будь-який біологічний зразок повинен пройти через ряд складних і виснажливих процесів обробки, щоб отримати зразки нуклеїнових кислот, які відповідають вимогам технології ПЛР.
Розділення та виділення ДНК і РНК завжди було основним завданням, яке відповідні наукові дослідники повинні повторювати щодня.
Через величезні відмінності між зразками процеси розділення та екстракції ДНК і РНК також дуже відрізняються.Ця робота вимагає від операторів високого рівня технічної підготовки.Традиційні методи поділу та екстракції вимагають тривалого контакту з деякими високотоксичними хімічними реагентами.Це призведе до незворотної шкоди організму оператора і навіть до прямої шкоди під час експерименту.
У той же час для тих, хто має велику кількість зразків для дослідження, поділ і екстракція нуклеїнових кислот є трудомістким завданням.
Набори для виділення та екстракції нуклеїнових кислот на ринку зараз зрілі, і існує багато торгових марок, але вони приблизно однакові.Незалежно від того, чи це набір для центрифугування колонки з силікагелевою мембраною чи набір для методу магнітних кульок, це займає багато часу та коштує дорого.Крім вартості набору, є ще особливі вимоги до лабораторного обладнання.Автоматизована робоча станція, яка використовується в методі магнітних кульок, є дуже типовим великомасштабним високовартісним обладнанням, яке є величезними витратами для лабораторії.
Підсумовуючи
Перед проведенням ПЛР-експериментів попередня обробка зразків є неминучим і завжди головним болем для дослідників.Про те, як вирішити цю проблему та чи можна проводити ПЛР-експерименти без розділення та екстракції нуклеїнових кислот, завжди думали більшість наукових дослідників та персоналу клінічних лабораторій.
Рішення Foregene
Після багатьох років кропітких досліджень технології прямої ПЛР і відповідних наборів Forgene успішно подолав багато вузьких місць і успішно досягнув прямої ПЛР для багатьох типів різних зразків із сильною стійкістю та адаптивністю, що дозволило дослідникам позбутися громіздкого та небезпечного розділення та екстракції нуклеїнових кислот.Це значно зменшить трудомісткість кожного, прискорить процес експерименту та заощадить витрати на наукові дослідження та тестування.
Розуміння та знання DirectPCR Forgene
По-перше, технологія DirectPCR — це технологія прямої ПЛР для різних біологічних зразків тканин.За цієї технічної умови немає необхідності розділяти та виділяти нуклеїнові кислоти, а зразок тканини безпосередньо використовується як об’єкт, а праймери цільового гена додаються для реакції ПЛР.
По-друге, технологія DirectPCR — це не лише традиційна технологія ампліфікації шаблону ДНК, але також включає ПЛР зі зворотною транскрипцією шаблону РНК.
По-третє, технологія DirectPCR не тільки безпосередньо виконує звичайні якісні ПЛР-реакції на зразках тканин, але також включає реакції кПЦР у реальному часі, що вимагає, щоб реакційна система мала сильну здатність протистояти фоновій флуоресцентній перешкоді та антагонізувати ендогенні гасники флуоресценції.
По-четверте, зразки тканин, на які націлена технологія DirectPCR, потребують лише вивільнення матриць нуклеїнових кислот і не видаляють білки, полісахариди, іони солі тощо, які заважають реакції ПЛР.Це вимагає, щоб полімераза нуклеїнової кислоти та ПЛР-мікс у реакційній системі мали чудову антиоборотність і адаптивність, а також могли забезпечити активність ферменту та точність реплікації в складних умовах.
По-п'яте, зразки тканин, на які націлена технологія DirectPCR, не піддавалися жодній обробці збагачення нуклеїновими кислотами, а кількість шаблону дуже мала, що вимагає надзвичайно високої чутливості та ефективності ампліфікації реакційної системи.
Висновок
Технологія DirectPCR є одним із найважливіших технологічних розробок та інновацій за останні 30 років з моменту народження технології ПЛР.Forgene був і надалі буде піонером і новатором цієї технології.
Перспективи застосування технології DirectPCR дуже широкі.Постійне вдосконалення та просування цієї технології, безсумнівно, принесе підривні зміни в науково-дослідну та інспекційну роботу.Це революція в технології ПЛР.
Час публікації: 21 лютого 2017 р
