Наступний аналіз можливих проблем уЩічнийтампон/FTA card DNA extraction is helpful to your experiment. In addition, for other experimental or technical problems in addition to operating instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. If you have any needs, please contact us at: 028-83360257 or E-mali:Tech@foregene.com.

Очисна колонка засмічена

У цьому наборі під час операції екстракції геномної ДНК колонка для очищення безпосередньо адсорбується на суміші ферментативного лізису зразка без етапу центрифугування, і колонка для очищення може бути заблокована через неповну ферментацію та високу в’язкість зразка.

Можливі наступні причини:

1. Неповне ферментативне розщеплення зразків тканин.

Рекомендація: час обробки зразка Foregene Protease можна відповідно подовжити або супернатант можна взяти після центрифугування при 12 000 об/хв (~13 400× ж) протягом 5 хв.

2. Надмірне використання зразків тканин або великих тканин.

Рекомендація: найкраще не перевищувати 1Щічний тампон у зразку;якщо зразок занадто великий, відповідно збільште дозу буфера ST1, Foregene Protease, буфера ST2.

3. В'язкість зразка занадто висока.

Рекомендація: Зразки можна відповідним чином розбавити 10 мМ Tris-HCl перед екстракцією геномної ДНК.

4. Фрагменти карти крові висмоктані.

Рекомендація: перехідний час центрифугування на етапі 6 екстракції генома плями крові (карта FTA) можна відповідно подовжити.

Низький вихід або відсутність ДНК

На вихід геномної ДНК часто впливають різноманітні фактори, зокрема походження зразка, умови зберігання зразка, підготовка зразка, маніпуляції тощо.

Геномну ДНК неможливо отримати під час екстракції

Можливі причини:

1. Неналежне збереження зразків або занадто тривале зберігання призводить до деградації геномної ДНК.

Рекомендація: мазки з порожнини рота бажано брати свіжі, і не рекомендується використовувати консервовані тампони для операцій із виділення геномної ДНК;зразки плям крові повинні гарантувати відповідну якість, а час зберігання не повинен бути надто довгим.

2. Занадто мало використання тканини може призвести до відсутності вилучення відповідної геномної ДНК.

Рекомендація: дотримуйтесьбукаl візьміть інструкції щодо взяття зразків у посібнику з експлуатації та протріть стільки разів, скільки можливо, щоб достатню кількість клітин можна було приєднати до тампона з порожнини рота для вилучення геномної ДНК;для вилучення зразка плями крові площу вирізання плями крові можна відповідно збільшити.

3. Foregene Protease неправильно зберігається, що призводить до зниження її активності або інактивації.

Рекомендація: Перевірте умови зберіганняФoregene Protease або замініть її на нову Foregene Protease для ферментативної реакції.

4. Неналежне збереження набору або надто тривалий час зберігання, що призводить до виходу з ладу деяких компонентів набору.

Рекомендація: Купуйте новийЩічний мазок ДНКізоляція набір для супутніх процедур.

5. Буфер WB не додає абсолютний етанол.

Рекомендація: переконайтеся, що буфер WB додає правильний об’єм абсолютного етанолу.

6. Елюент неправильно додано до силіконової плівки.

Рекомендація: додати 65°Cпопередньо нагрітий елюент капає до середини силіконової мембрани та залишає при кімнатній температурі на 5 хв, щоб підвищити ефективність елюювання.

Low-yield геномна ДНК ізольований

Можливі наступні причини:

1. Неналежне збереження зразків або занадто тривале зберігання призводить до деградації геномної ДНК.

Рекомендація: мазки з порожнини рота бажано брати щойно взяті, а збережені тампони не слід використовувати для екстракції геномної ДНК.

2. Якщо кількість зразка тканини занадто мала, вміст екстрагованої геномної ДНК буде меншим.

Рекомендація: дотримуйтесь інструкцій із взяття мазка з ротової порожнини в посібнику з експлуатації, протираючи стільки разів, скільки можливо, щоб достатню кількість клітин можна було прикріпити до тампона з порожнини рота для екстракції геномної ДНК.

3. Foregene Protease неправильно зберігається, що призводить до зниження її активності або інактивації.

Рекомендація: Перевірте умови зберіганняthe Foregene Protease або замініть його на новий Foregene Protease для ферментативної реакції.

4. Проблеми елюентів.

Рекомендація: використовуйте буфер EB для елюції;якщо використовується ddH₂O або інших елюентів, переконайтеся, що рН елюату становить 7,0-8,5.

5. Елюат неправильно доданий по краплях.

Рекомендація: додайте краплі елюенту в середину силіконової мембрани та залиште при кімнатній температурі на 5 хвилин, щоб підвищити ефективність елюювання.

6. Елюююча рідина накопичується занадто мало.

Рекомендація: Використовуйте елюент для елюції геномної ДНК як мінімум відповідно до інструкцій.не менше ніж 15μl.

Lву чистоту of геномна ДНКізольований

Низька чистота геномної ДНК може призвести до невдачі або незадовільних результатів подальших експериментів, наприклад: ферменти не можуть бути розрізані, ПЛР не може отримати потрібний фрагмент гена тощо.

Можливі причини:

1. Гетеропротеїнове забруднення, забруднення РНК.

Аналіз: колонку для очищення не промивали буфером PW;колонка для очищення промивного буфера PW не була промита за допомогою правильної відцентрової швидкості.

Рекомендація: перед додаванням етанолу переконайтеся, що в надосадовій рідині немає осаду;обов’язково промийте очисну колонку відповідно до інструкцій, і цей етап не можна пропускати.

2. Забруднення домішковими іонами.

Аналіз: Колонка для промивання буфера WB була пропущена або промита лише один раз, що призвело до залишкового іонного забруднення.

Рекомендація: обов’язково промийте Buffer WB 2 рази відповідно до вказівок, щоб якомога більше видалити залишкові іони.

3. Забруднення ферменту РНК.

Аналіз: Чужі РНКази були додані до буфера;Операція промивання буфера PW була неправильною, що призвело до появи залишків РНКази, що вплинуло на експериментальні операції РНК нижче за течією, такі як транскрипція in vitro.

Рекомендація: нуклеїнова кислота серії Foregeneізоляціянабори можуть видаляти РНК без додаткового додавання РНКази,таким чином Набір для виділення ДНК буккального тампона/картки FTAпотрібно't додати РНКазу;обов’язково дотримуйтесь інструкцій для колонки для промивання буфера PW, і цей крок не можна пропускати.

4. Залишок етанолу.

Аналіз: Буфер WB не проводив центрифугування порожніх пробірок після промивання колонки для очищення.

Рекомендація: Виконайте правильну операцію центрифугування порожніх пробірок відповідно до інструкцій.

5. Інші забруднення домішками.

Аналіз: Збережені зразки або спеціальні зразки попередньо не обробляються.

Рекомендація: Ретельно попередньо обробіть зразок згідно з інструкцією.