Лабораторне тестування починається з відбору зразків, і цей збір найлегше не помітити.Найважливішим для збору зразків є вибір правильного типу зразка, використання відповідних інструментів для відбору зразків і здійснення розумного транспортування та обробки.

I. Тип зразка

Загальні типи зразків:

Спосіб відбору проб може посилатися на технічні умови екологічного моніторингу нового коронавірусу на ринку сільськогосподарської торгівлі (базару)»:

1. Зразки мазків з горла, рук, одягу та інших предметів практикуючих лікарів: необхідно використовувати розчин для збереження вірусу в пробірці для забору вірусу та повністю просочити ватні тампони для взяття зразків.Поверхня грунту) наноситься багаторазово і промивається більше 3 разів.При цьому необхідно проводити багатоточковий розподілений відбір проб на поверхні досліджуваного об'єкта.

2. Зразки харчових поверхонь: зразки харчових продуктів не можна збирати безпосередньо.Їжу, яку потрібно зібрати, слід ретельно відокремити та зберігати в чистому мішку для взяття проб перед тим, як збирати зразки мазків.Після повного змочування ватного тампона для відбору зразків слід використовувати розчин для збереження вірусів у пробірці для відбору зразків, щоб кілька разів змастити та промити поверхню зразка їжі більше 3 разів.При цьому необхідно проводити багатоточковий розподілений відбір на поверхні зразка.

3. Зразки стічних вод: відповідно до розподілу дренажної системи на ринку, виберіть 2-3 місця для відбору проб стічних вод, зосереджуючись на зборі внутрішньої трубної мережі, нижньому за течією напрямку потоку води або з’єднанні з муніципальною мережею труб.Щоб зібрати зразок тампона, занурте його в стічні води за допомогою ватного тампона для збору зразків, щоб він адсорбував стічні води, і промийте його в трубці для зразків більше ніж 3 рази.Для збору зразків стічних вод використовуйте поліетиленові пластикові пляшки для збору 30-500 мл проб стічних вод;для збору стічних вод об’ємом понад 500 мл можна використовувати поліетиленові пластикові відра або спеціальне обладнання для збагачення проб води на місці.При цьому необхідно проводити багатоточковий розподілений відбір проб для місця відбору проб стічних вод.

4. Зразки тварин: для живих тварин можна використовувати мазки для взяття проб з поверхні тіла, мазки з ротоглотки та анального отвору, а також зразки екскрементів або виділень також можна зібрати та записати відповідним чином у реєстраційний лист.Для зразків тварин, з яких зняли шкіру тощо, використовуйте ватні тампони, щоб зібрати зразки з поверхні їхнього тіла та мазків з порожнини тіла.Необхідно використовувати розчин для збереження вірусів у пробірці для відбору вірусів, щоб повністю проникнути у ватний тампон для відбору зразків, а потім повторити нанесення на поверхню зразка їжі, який збирають.Шабу більше 3 разів.При цьому необхідно проводити багатоточковий розподілений відбір на поверхні зразка.

5. Інші прилади: контейнери для транспортування та розведення тварин, такі як клітки або акваріуми.По-перше, поспостерігайте або зрозумійте конкретні види тварин, які зберігаються та розводяться в контейнері, і візьміть зразки мазків на внутрішній стінці контейнера або рідкі зразки вмісту.

6. Збирайте зразки аерозолів у місцях скупчення людей, погано провітрюваних торгових приміщеннях, офісах та туалетах.

II.Інструменти відбору проб
1. Пробірка для забору крові
Якщо вам потрібно провести аналіз нуклеїнової кислоти та зразки антикоагулянту пізніше, рекомендується використовувати вакуумну кровоносну судину, що містить антикоагулянт EDTA, для збору крові;для зразків сироватки рекомендується використовувати вакуумну кровоносну судину без антикоагулянту.

2. Тампон для взяття проб

Рекомендується використовувати поліпропіленові тампони замість тампонів з альгінату кальцію або тампонів з дерев’яними стовпчиками, оскільки вони можуть містити речовини, які інактивують певні віруси та перешкоджають ПЛР-тесту.Тампони з ватними головками не можна використовувати, оскільки бавовняні волокна мають сильну адсорбцію білка і нелегко вимиваються в наступний консервуючий розчин.

У «Технічних специфікаціях для змішаного збору та виявлення нових нуклеїнових кислот коронавірусу 10 в 1» чітко зазначено, що «тампон для взяття зразків має бути виготовлений з поліестеру, нейлону та інших матеріалів, що не містять бавовни та альгінату кальцію, а ручка має бути виготовлена ​​з недеревного матеріалу.Точка розриву знаходиться приблизно в 3 см від верхньої частини головки тампона, яку легко зламати».

CDC у Сполучених Штатах також зазначив: «Використовуйте лише тампони з синтетичного волокна з пластиковими або дротяними стрижнями.Не використовуйте тампони з альгінатом кальцію або тампони з дерев’яними стержнями,оскільки вони можуть містити речовини, які інактивують деякі віруси та перешкоджають ПЛР-тесту.

В даний час широко використовується одноразовий стерильний нейлоновий тампон для флокування в поєднанні з пластиковим стрижнем.Флокуючий тампон має кращу водопоглинання та швидкість вивільнення.Залежно від різних місць відбору проб головка тампона також має різні розміри та волокна.Товщина.»

3. Зразок транспортного консерваційного розчину

Консервуючий розчин для інактивації вірусу: відповідна кількість концентрації солі гуанідину та різноманітні компоненти лізису вірусу можуть безпосередньо лізувати вірус для вивільнення нуклеїнової кислоти, інактивації РНКази та ДНКази та забезпечення цілісності нуклеїнової кислоти, яка може бути використана для подальшого виявлення qPCR.Його не можна використовувати для культивування та виділення вірусу.

Розчин для транспортування та збереження вірусів: містить солі, амінокислоти, вітаміни, глюкозу та білок, необхідні для виживання вірусу, які можуть підтримувати активність вірусу.Його можна використовувати для вилучення нуклеїнової кислоти та виявлення вірусу в майбутньому, а також для культивування та відділення вірусу.

4. Пробірка для зберігання зразків і пакет для зразків

Пробірка для зберігання зразка має бути стерильною пластиковою пробіркою з гвинтовою кришкою, яка не адсорбує нуклеїнову кислоту.Кожну пробірку для зразків слід накрити пакетом для зразків, щоб запобігти витоку та забрудненню зразка.

III.Заважаючі речовини в зразку

Інтерферуючі речовини в ПЛР експериментах

1. ендогенні інтерферентні

Речовини, присутні в зразку тіла, можуть перешкоджати виявленню інших речовин.

Кров:гем (>1 мг/мл), гемін (>0,1нг/мкл), тригліцериди, IgG тощо;

Сеча:Сечовина (20 мМ);

Табурет:рослинні полісахариди, холат;

Тканина:протеаза, колаген;

молоко: протеаза, іон кальцію;

наркотики: антибіотики, противірусні препарати, гормони та ін.

інший.

2. екзогенні заважають

Він походить від речовин, які можуть перешкоджати виявленню інших речовин in vitro.Добавки та речовини зразка, з якими можна контактувати під час відбору та обробки зразка:

Тестові матеріали: гель для розділення сироватки, контейнер для збору зразків і гумова пробка, катетер, рідина для промивання катетера, порошок для рукавичок тощо.

Антикоагулянти: гепарин (>0,1 ОД/мл), EDTA (>0,5 мМ) тощо;

Органічні розчинники: ізопропанол (>0,1 МО/мл), бетаїн, диметилсульфоксид, формамід, гліцерин, ПЕГ тощо;

Дезінфікуючі засоби: спирти (етанол>1%), альдегіди, феноли (фенол>0,2%), пероксиди, сильні кислоти (HCL), сильні луги (NaOH) тощо;

Миючий засіб:SDS (>0,005%);

грунт: Гумус

барвник: індиго

інший.

За фактичних умов відбору проб на відкритому повітрі, таких як збір зразків навколишнього середовища, зразки можуть містити різноманітні заважаючі речовини, а склад заважаючих речовин у кожному місці є різним, що вимагає проведення експериментів із завадою ПЛР відповідно до місцевих умов.

IV.Умови зберігання та транспортування зразків

Свіжозібрані клінічні зразки слід відправити в лабораторію протягом 2-4 годин після збору при температурі від 2°C до 8°C.Зберігати при 4 ℃ протягом 24 годин.Зразки, які використовуються для виділення вірусу та виявлення нуклеїнових кислот, слід перевірити якомога швидше.Зразки, які можна перевірити протягом 24 годин, можна зберігати при 4°C;зразки, які не можна виявити протягом 24 годин, слід зберігати при -70°C або нижче (якщо ні – зберігати при 70°C у холодильнику при -20°C).

Резюме:Стандартизований збір, транспортування та зберігання зразків є важливими для подальшого тестування.Хибнонегативні результати багатьох лабораторних тестів викликані неправильним збором, транспортуванням і зберіганням зразків, що призводить до деградації нуклеїнової кислоти вірусу.Однак багато лабораторій все ще ігнорують важливість взяття проб.Я сподіваюся, що ця стаття зможе пробудити загальну увагу до відбору проб і зробити вибірку більш науковою та обґрунтованою!

Пов'язаний продукт:

SARS-CoV-2 Варіантний набір для виявлення нуклеїнової кислоти (I) (метод мультиплексного ПЛР з флуоресцентним зондом) - для виявлення мутантів із Бразилії, Південної Африки та Великобританії