Скільки ти знаєш

Про Некстракція уклеїнової кислоти

Початок і кінець очищеної нуклеїнової кислоти

Спочатку все складно, очищена нуклеїнова кислота найбільше

Початок молекулярних експериментів для подальших експериментів

Успіх чи невдача має вирішальний вплив.

Ультрафіолетовий спектрофотометр Trace/ultratrace віддають перевагу багатьом науковцям, оскільки він може просто, швидко та економічно виявляти концентрацію нуклеїнової кислоти, а також залишки іонів білка та солі.

Як ми всі знаємо, A260 означає значення OD абсорбції нуклеїнової кислоти, A280 означає значення OD абсорбції концентрації білка, A230 означає значення OD абсорбції концентрації іонів солі, тому A260 може конвертувати концентрацію нуклеїнової кислоти, A260/280 означає залишок білка, A260/230 означає залишок іонів солі, але це лише правило, виявлене дослідниками на основі великої кількості результатів вимірювань, і це ”звичайний» вірити, що це може пояснити чистоту ДНК і РНКпевною мірою.Це не єдиний стандарт для ідентифікації виходу та чистоти нуклеїнової кислоти, він використовується лише як еталон і не є «золотим стандартом».

Інструкція Thermo Fisher ND-2000 підкреслює достовірність результатів тесту

Причина полягає в тому, що результати, отримані за допомогою мікро/ультрамікро УФ спектрофотометра, відображають лише вихід і чистоту нуклеїнової кислоти збоку, і існує багато факторів, що впливають (оптичний шлях, об’єм зразка, концентрація зразка, значення рН, інші іони, які впливають на вимірювання абсорбції тощо), виміряне значення ОП не обов’язково є точним.У той же час, через відсутність специфічності матеріалу для визначення значення поглинання, одноланцюгова ДНК, дволанцюгова ДНК, РНК, dNTP і деякі білки мають піки поглинання на довжині хвилі 260 нм, і концентрація, визначена лише A260, не обов’язково є справжньою ДНК або РНК.Не можна судити про концентрацію, її цілісність і деградацію.

Отже, як судити про якість нашої очищеної нуклеїнової кислоти?На додаток до використання мікро/ультрамікро УФ спектрофотометра для виявлення, такі методи, як електрофорез у агарозному гелі, також необхідні для візуального відображення чистоти та цілісності нуклеїнової кислоти та визначення концентрації до певної міри.Таким чином, вихід і чистота нуклеїнової кислоти, отримані за результатами виявлення різними методами, є достовірними.

Порівняння експериментальної діаграми

Геномну ДНК клітин H1299 екстрагували за допомогою наборів для екстракції ДНК компанії А, і було виявлено значне забруднення домішками, що призвело до високих значень OD

(Виміряне значення OD та відповідна електроферограма)

Індекс оцінки

Чи існує «золотий стандарт» для тестування виходу нуклеїнової кислоти та якості?

Наскільки відомо, простого, швидкого і дешевого методу не існує.Будь то спектрофотометр, гель-електрофорез або мас-спектрометрія, усі вони відображають концентрацію та чистоту нуклеїнової кислоти в розчині з різних аспектів, і їх потрібно оцінювати, посилаючись один на одного.

Найкращий показник оцінки завждиподальше експериментальне застосування.Не впливає на ефективність зворотної транскрипції та ПЛР-ампліфікації.Отримання надійних продуктів ампліфікації та значень Ct, а також отримання повної послідовності шляхом секвенування є успішною екстракцією нуклеїнової кислоти.

Підводячи підсумок, слід заперечити точку зору теорії лише співвідношення через точку зору «використання хороших експериментальних результатів нижньої течії як хороших параметрів екстракції»!

Рекомендовані набори Foregene для екстракції ДНК/РНК для отримання високої чистоти ДНК/РНК:

https://www.foreivd.com/reagent/dna-isolation-series/

https://www.foreivd.com/reagent/rna-isolation-series/