W:Брате, зворотня транскрипція завершена, і нарешті останній крок – флуоресцентна кількісна ПЛР!Гей, брате, що таке кількісна ПЛР у реальному часі?
M:PCR ви завжди знаєте, правда?
W: Знаєте, ПЛР — це полімеразна ланцюгова реакція, і це технологія, яка збільшує ДНК!
М: Це майже… Це технічний метод ампліфікації цільової послідовності більш ніж в один мільйон разів за допомогою специфічних праймерів, але це лише вказує на наявність або відсутність цільової послідовності та не може визначити кількість вихідної матриці.Флуоресцентна кількісна ПЛР є технічним методом, розробленим для вирішення цієї проблеми.ПЛР у реальному часі та кількісна ПЛР (кПЦР) зазвичай відносяться до нього.
W: Відмінність від звичайної ПЛР полягає в кількісному визначенні флуоресценції?
M: Так, тобто на стадії подовження кожного циклу ПЛР виявляється інтенсивність сигналу флуоресценції, і початкову кількість матриці можна розрахувати відповідно до зміни інтенсивності сигналу.
W: Це так складно!Чи повинен я розрахувати це сам?
М: Для цього потрібно вчитися повільно, найкраще зрозуміти принцип.Тепер ви можете спочатку зосередитися на значенні CT, яке є відносно інтуїтивно зрозумілими експериментальними даними, а його розмір відповідає розміру початкової суми шаблону.Є також такі графіки, як криві посилення та криві плавлення.Вони мають останнє слово щодо того, успішний ваш експеримент чи ні.
В: О, брате.Тоді я збираюся провести експеримент КПЦР!
M: Зверніть особливу увагу на те, щоб не додавати шаблони в область реагентів, інакше ваша невикористана суміш легко забрудниться!
W: Зрозумів!

ПЛР у реальному часі Easyᵀᴹ-SYBR Green I Kit

Вища ефективність, більша специфічність
Висока чутливість, хороша сумісність